Antrodan 合併或不合併順鉑對小鼠異種移植模型中 Lewis 肺癌的抗轉移作用

摘要

Antrodan 是一種獨特的蛋白質結合多醣，源自Antrodia cinnamomea 的真菌菌絲體，據報道具有抗腫瘤和抗轉移作用透過體外直接作用和免疫調節對 Lewis 肺癌 (LLC) 細胞產生影響。在這項研究中，我們研究了antrodan與抗癌藥物順鉑的聯合治療及其在小鼠異種移植腫瘤模型中的潛在分子作用機制。 C57BL/6 小鼠皮下植入 LLC 9 天，然後每天僅給予 antrodan（20 mg/kg 和 40 mg/kg；口服），每週僅給予順鉑（1 mg/kg；腹腔注射）兩次，或兩者結合，再持續28 天。正如預期的那樣，antrodan 本身顯著抑制肺和肝組織的轉移，而順鉑治療僅抑制肝臟的轉移。 Antrodan 與順鉑合併使用，透過抑制血漿尿激酶纖溶酶原活化劑(uPA) 和肝基質金屬蛋白酶9 (MMP-9) 的活性，以及​​抑制p38 和細胞外訊號調節激酶的磷酸化，表現出有效的輔助治療效果2 (ERK2) 存在於肺部和肝臟組織中。此外，在聯合治療時，antrodan 可有效改善順鉑誘導的腎功能障礙，而順鉑誘導的血漿中血尿素氮 (BUN) 水平和腎臟中 p38 磷酸化水平的降低證明了這一點。從機制上講，antrodan 本身的作用涉及 (i) 降低血漿中 uPA 和 MMP-2 和 -9 的活性； (ii) 減少MMP-2/9 的蛋白質表達，以及訊號轉導子和轉錄激活子3 (STAT3) 和絲裂原激活蛋白激酶(MAPK) 的磷酸化，包括細胞外信號調節激酶(ERK)、 c-Jun肺和肝組織中的 N 端激酶 (JNK) 和 p38； (iii) 增強免疫系統功能，透過免疫調節，增加血漿中乾擾素-γ (IFN-γ) 水平並降低白血球介素-6 (IL-6) 水平，從而促進抗轉移反應。這些結果表明，antrodan 透過調節 STAT3/MAPK/ERK/JNK 訊號通路和宿主免疫系統來減弱 MMP-2 和 -9 的活性，從而提供了一種針對癌症轉移的新型補充治療策略。 p>
圖
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用於評估的時間表...

圖1

用於評估僅使用antrodan 治療效果的時間表，以及... < /p>圖 1 用於評估僅使用 antrodan 治療以及 antrodan 與順鉑聯合治療對患有 Lewis 肺癌 (LLC) 的 C57BL/6 小鼠的效果的時間表。第0 天將LLC 細胞（105 個細胞/小鼠）皮下注射到每隻小鼠的右側腹中。進行治療/kg 或 40 mg/kg 體重 (BW) 每天，持續 28 天。僅以順鉑治療，以腹腔內推注，每週兩次，劑量為 1 mg/kg BW。研究中同時進行了順鉑（1 mg/kg）與低劑量（20 mg/kg）或高劑量antrodan（40 mg/kg）的合併治療。

圖2

< p> 使用antrodan 治療的效果...

圖2

僅使用antrodan、僅使用順鉑以及兩者聯合治療的效果...

圖2使用antrodan 治療的效果在攜帶 LLC 的 C57BL/6 小鼠上僅使用 antrodan、僅使用順鉑以及兩者的組合。對體重的影響(A)、對原發腫瘤面積的影響(B)及對原發腫瘤形態的影響(C) 。將 LLC 細胞（1 × 105 個細胞/100 µL）皮下注射到 C57BL/6 小鼠的右側腹中。注射9天后，小鼠每天接受antrodan（20 mg/40kg和40 mg/kg；口服），每週兩次順鉑（1 mg/kg，腹腔內注射），或兩者合併用藥持續28天。每週測量兩次體重。腫瘤面積計算公式為：長×寬×(π÷4)。上標共享一個字母的平均值沒有顯著差異(p＞0.05)。

圖3

< p> 使用antrodan 治療的效果...

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僅使用antrodan、僅使用順鉑以及兩者聯合治療的效果...

圖3使用antrodan 治療的效果僅安曲丹、僅順鉑以及兩者的組合對攜帶LLC 的C57BL/6 小鼠的肺（左圖）和肝（右圖）病灶的影響。腫瘤對照組的轉移百分比為100%。在每個組織內，不具有共同字母的值顯著不同(p＜0.05)。

圖4

< p> 使用antrodan 治療的效果...

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僅使用antrodan、僅使用順鉑以及兩者聯合治療的效果...

圖4使用antrodan 治療的效果僅antrodan、僅順鉑以及兩者的組合對攜帶LLC 的C57BL/6 小鼠血漿中基質金屬蛋白酶2 (MMP-2)、MMP-9 和尿激酶纖溶酶原激活劑( uPA) 的蛋白質表現的影響。空白對照組酵素活力為100%。在每種酵素中，不具有共同字母的值顯著不同（p＜0.05）。

圖5

< p> 使用antrodan 治療的效果...

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僅使用antrodan、僅使用順鉑以及兩者聯合治療的效果...

圖5使用antrodan 治療的效果僅antrodan、僅順鉑以及兩者的組合對MMP-2 和MMP-9 的蛋白表達以及信號轉導子和轉錄激活子3 (STAT3)、細胞外信號調節激酶1 (ERK)的磷酸化和蛋白質表現的影響-1)、C57BL/6 小鼠肺組織中的 c-Jun N 端激酶 1 (JNK1)、JNK2 和 p38。使用AlphaEaseFC 軟體對每種蛋白質水平的變化進行定量，相對數據相對於β-肌動蛋白水平進行標準化，並包含在每個印跡下，將對照水平視為100。不同字母的數值顯著不同（p＜0.05）。

圖6

< p> 使用antrodan 治療的效果...

圖6

僅使用antrodan、僅使用順鉑以及兩者聯合治療的效果...

圖6使用antrodan 治療的效果僅antrodan、僅順鉑以及兩者的組合對C57BL/6小鼠肝組織中MMP-2和MMP-9的蛋白表達以及STAT3、ERK1、JNK1、JNK2和p38的磷酸化和蛋白表達的影響。使用AlphaEaseFC 軟體對每種蛋白質水平的變化進行定量，相對數據相對於β-肌動蛋白水平進行標準化，並包含在每個印跡下，將對照水平視為100。不同字母的數值顯著不同（p＜0.05）。

圖7

< p>腫瘤生長的組織學分析…

圖7

LLC細胞在肺部的腫瘤生長和轉移的組織學分析…

圖7腫瘤生長和轉移的組織學分析…

腫瘤細胞植入並口服antrodan 或腹腔注射後，C57BL/6 小鼠肺（上圖）和肝臟（下圖 ）中LLC 細胞的轉移。順鉑給藥。在顯微鏡下觀察並拍攝了多個輕度至中度腫瘤細胞以腫瘤栓子形式（箭頭）通過血管或淋巴管轉移至肺和肝臟的形態，這些腫瘤栓子也在肺實質中生長。和400×放大倍率）腫瘤對照組（a和A），以及僅用安曲丹治療組（20 mg/kg，b< /b > 和B；40 mg/kg，c 和C），僅順鉑（1 mg/kg）（d < /b> 和D），antrodan（20 mg/kg）和順鉑（e 和E）的組合，以及antrodan (40 mg/kg) 和順鉑(f 和F)。 antrodan (40 mg/kg) 和順鉑 (f 和 F) 合併治療對肝轉移有完全抑製作用。

圖8

< p> 使用antrodan 治療的效果...

圖8

僅使用antrodan、僅使用順鉑以及兩者聯合治療的效果...

圖8使用antrodan 治療的效果僅antrodan、僅順鉑以及兩者的組合對C57BL/ 中BUN 水平(A) 以及腎組織中p38 磷酸化和蛋白表達(B) 的影響6隻老鼠。磷酸化 p38 (p-p38)、p38 和 β-肌動蛋白 (B-upper) 的蛋白質印跡。蛋白質表現的光密度分析（B-lower）。使用AlphaEaseFC 軟體對每種蛋白質水平的變化進行定量，相對數據相對於β-肌動蛋白水平進行標準化，並包含在每個印跡下，將對照水平視為100。值的值字母顯著不同（p < 0.05）。在蛋白質印跡中，上標不同字母的值顯著不同（p < 0.05）（B-upper）。

圖9

< p> 觀察到的治療效果...

圖9

觀察到的僅使用安曲丹、僅使用順鉑及其組合治療的效果... 圖9 觀察到的治療效果在本研究中，對攜帶 LLC 的 C57BL/6 小鼠僅使用 antrodan、僅使用順鉑及其組合進行治療。 *：單獨使用 Antrodan 療程。 ↓：抑製作用。 所有人物 (9)