Antcin K 抑制人類風濕性關節炎滑膜成纖維細胞中 VCAM-1 依賴性單核細胞黏附
摘要
數字
Fig. 1
細胞黏附分子水平...
Fig. 1
細胞水平RA滑膜組織中黏附分子的表達。 (a) 記錄下載...
圖1 RA滑膜組織中細胞黏附分子的表達量。 (a) 從GEO 資料庫（登錄代碼：GDS5401）下載的記錄在10 名RA 患者的滑膜組織樣本中篩選了四種主要CAM 類別（鈣粘蛋白、整合素、選擇素和免疫球蛋白超家族的CAM）的蛋白質表現標記物和 10 位健康個體 (b, c)。 RA 和正常滑膜組織中 VCAM-1 和 CD11b 的表達量。 RA，類風濕性關節炎； NL，正常對照。 *P＜與正常對照組相比為0.05。
圖2
< p> VCAM-1 和CD11b 上調...圖2
人類RA 滑膜組織中VCAM-1 和CD11b 表現上調。 (a) 免疫染色…
圖 2 人類 RA 滑膜組織中 VCAM-1 和 CD11b 表現的上調。 (a) 人類 RA (n = 6) 和正常組織 (n = 6) 中 VCAM-1 表現的免疫染色。黑色箭頭表示滑膜組織中 VCAM-1 的表達量。 (b) 以 IHC 評分量化 VCAM-1 表現。 (c) RA (n = 6) 和正常組織 (n = 6) 中 CD11b 表達的 IHC 染色。黑色箭頭表示滑膜組織中 CD11b 的表達量。 (d) 以 IHC 評分對 CD11b 表現進行定量。 RA，類風濕性關節炎； NL，正常對照。 *P＜與正常對照組相比為0.05。
圖3
< p> Antcin K 抑制VCAM-1 表現...圖3
Antcin K 抑制人類RASF 中的VCAM-1 表現和單核細胞黏附。 (a, b)…
圖 3 Antcin K 抑制人類 RASF 中的 VCAM-1 表現和單核細胞黏附。 (a, b) 將 Antcin K (0.3–10 μM) 給予 RASF 24 小時，然後使用 RT-qPCR (n = 4) 和蛋白質印跡分析 (n = 3) 檢查 VCAM-1 表現。 (c, d) RASF 與指定濃度的 Antcin K 一起孵育 24 小時。然後將 BCECF-AM 標記的 THP-1 細胞加入 RASF 中 1 小時。透過螢光顯微鏡檢查培養的 RASF 中的單核細胞黏附並拍照 (n = 4)。 *P＜與對照組相比0.05。
圖4
< p> MEK1/2 路徑參與…圖4
MEK1/2 路徑參與Antcin K 誘導的VCAM-1 抑制。 (a) Antcin K…
圖 4 MEK1/2 路徑參與 Antcin K 誘導的 VCAM-1 抑制。 (a) 將 Antcin K (0.3–10 μM) 給予 RASF，並以蛋白質印跡分析 (n = 3) 分析 MEK1/2 磷酸化。 (b–e) 以 MEK 活化劑 (PAF C-16) 刺激 RASF 30 分鐘，然後以 10 μM Antcin K 孵育 24 小時。以 RT-qPCR (n = 4) 和 Western blot (n = 3) 分析 VCAM-1 水準。以單核細胞黏附測定（n = 4）測定培養的 RASF 中的單核細胞黏附。 *P＜與對照組相比0.05； #P <與 Antcin K 處理相比為 0.05。
圖5
< p> ERK 路徑參與…圖5
ERK 路徑參與Antcin K 誘導的VCAM-1 抑制。 (a) RASF 是…
圖 5 ERK 路徑參與 Antcin K 誘導的 VCAM-1 抑制。 (a) 以 Antcin K (0.3–10 μM) 處理 RASF 24 小時，然後以蛋白質印跡檢查 ERK 磷酸化 (n = 3)。 (b–e) 以 ERK 活化劑（神經醯胺 C6）刺激 RASF 30 分鐘，然後以 10 μM Antcin K 孵育 24 小時。以 RT-qPCR (n = 4) 和 Western blot (n = 3) 分析 VCAM-1 水準。以單核細胞黏附測定（n = 4）測定培養的 RASF 中的單核細胞黏附。 *P＜與對照組相比0.05； #P <與 Antcin K 處理相比為 0.05。
圖6
< p> p38 路徑參與…圖6
p38 路徑參與Antcin K 誘導的VCAM-1 抑制。 (a) RASF 是…
圖 6 p38 路徑參與 Antcin K 誘導的 VCAM-1 抑制。 (a) 以 Antcin K (0.3–10 μM) 處理 RASF 24 小時，然後以蛋白質印跡檢查 p38 磷酸化 (n = 3)。 (b–e) 以 p38 活化劑（茴香黴素）刺激 RASF 30 分鐘，然後用 Antcin K (10 μM) 孵育 24 小時。以 RT-qPCR (n = 4) 和 Western blot (n = 3) 檢查 VCAM-1 水準。以單核細胞黏附測定（n = 4）檢查培養的 RASF 中的單核細胞黏附。 *P＜與對照組相比0.05； #P <與 Antcin K 處理相比為 0.05。
圖7
< p> AP-1 路徑參與…圖7
AP-1 路徑參與Antcin K 誘導的VCAM-1 抑制。 (a) RASF 是…
圖 7 AP-1 路徑參與 Antcin K 誘導的 VCAM-1 抑制。 (a) 以 Antcin K (0.3–10 μM) 處理 RASF 24 小時，然後以蛋白質印跡檢查 c-Jun 磷酸化 (n = 3)。 (b–e) 以 AP-1 活化劑 (D-erythro-SPC) 刺激 RASF 30 分鐘，然後以 Antcin K (10 μM) 孵育 24 小時。以 RT-qPCR (n = 4) 和 Western blot (n = 3) 檢查 VCAM-1 水準。以單核細胞黏附測定（n = 4）檢查培養的 RASF 中的單核細胞黏附。 (f) 以 AP-1 螢光素酶質粒轉染 RASF，然後以指定濃度的 Antcin K 處理，並對螢光素酶活性進行定量。 *P＜與對照組相比0.05； #P <與 Antcin K 處理相比為 0.05。
圖8
< p> Antcin K 降低組織學嚴重度...圖8
Antcin K 降低RA 疾病的組織學嚴重程度。 (a) 來自對照踝關節的檢體...
圖 8 Antcin K 降低了 RA 疾病的組織學嚴重程度。 (a) 來自對照踝關節、CIA 踝關節和 Antcin K 處理的 CIA 踝關節的樣本用 H&E 和 Safranin-O 複染，然後用 VCAM-1 和 CD11b 抗體進行免疫染色 (n = 4)。 (b–c) 以 IHC 評分對 VCAM-1 和 CD11b 表現進行定量 (n = 4)。 #P <與對照組相比 0.05； *P＜與未治療的 CIA 小鼠相比為 0.05。
圖9
< p> 此圖解說明如何...圖9
此圖解說明了Antcin K 的抗關節炎機制是如何透過...實現的
圖9 此圖解說明了 Antcin K 的抗關節炎機制是如何透過 MEK1/2-ERK、p38 和 AP-1 訊號路徑抑制 VCAM-1 來實現的。 所有人物 (9)