牛樟芝透過靶向 PI3K/AKT 介導的體外和體內細胞週期進程發揮抗肝癌作用

摘要

牛樟芝作為傳統藥物被廣泛用於預防和治療肝癌。然而，其綜合化學指紋尚不確定，其機制，特別是抗肝細胞癌（HCC）的潛在治療標靶仍不清楚。使用 UPLC-Q-TOF/MS，鑑定出 A 中的 139 種化學成分。肉桂滴丸（ACDP）。基於這些化學成分，網絡藥理學證明活性成分的標靶在癌症路徑中顯著富集，與細胞增殖調控密切相關。接下來，從基因表現綜合資料庫（GEO）下載 HCC 資料。透過生物資訊分析癌症基因組圖譜（TCGA）和DisGeNET，獲得79個生物標記。此外，還揭示了ACDP活性成分的9個標靶，它們在PI3K/AKT和細胞週期訊號通路中顯著富集。透過分子對接預測這些標靶與其相應活性成分之間的親和力。最後，體內和體外實驗表明，ACDPs可以降低PI3K/AKT訊號通路的活性，下調細胞週期相關蛋白的表達，從而導致細胞週期相關蛋白的表達降低。總而言之，PI3K/AKT 細胞週期似乎是 A 抗肝癌的重要中心節點。 Cinnamomea。 >

圖文摘要

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圖 1

預測流程圖...

圖 1

活性成分目標預測流程圖ACDPs by …

圖1 透過生物資訊預測ACDPs 活性成分標靶的流程圖。

圖 2

化學物質鑑定結果成分...

圖2

化學成分鑑定結果。 (A) antcin的質譜圖和裂解途徑...

圖2化學成分鑑定結果。 (A) antcin A 的質譜和裂解途徑。 /gr3.jpg" alt="圖3" />

圖3

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圖3

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圖 3 ACDP 活性成分的目標結果。 (A) ACDP 的組件-目標網圖。 (B) 目標的 GO 富集分析直方圖。 (C) 目標的KEGG富集分析氣泡圖。

圖 4

DEG 的結果HCC …

圖4

GEO資料庫中HCC相關資料集的DEG結果。 (A)-(D) PCA 圖…

圖 4 GEO 資料庫中 HCC 相關資料集的 DEG 結果。 (A)-(D) GSE14520、GSE45267、GSE64041 和 GSE112790 的 PCA 圖。 (E)-(H) GSE14520、GSE45267、GSE64041 和 GSE112790 中 DEG 的火山圖。 (I)-(L) GSE14520、GSE45267、GSE64041 和 GSE112790 中 DEG 的熱圖。 (M) 上調和下調的 20 個 DEG 的熱圖。

圖 5

DEG 濾波結果< /p>

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TCGA 資料庫過濾與選擇的DEG 結果。 (A)-(E) 的生存曲線...

圖 5 TCGA 資料庫篩選和選擇的 DEG 結果。 (A)-(E) AURKA、CCNB1、CDK1、SAE1 和 TOP2A 在 HCC 患者中的生存曲線。 (F)-(J) AURKA、CCNB1、CDK1、SAE1 和 TOP2A 在 HCC 患者的 ROC 曲線。

圖 6

富集分析結果of...

圖6

ACDP 的HCC 相關標靶富集分析結果。 (A) Veen 圖…

圖 6 ACDP 的 HCC 相關標靶富集分析結果。 (A) 活性成分和 HCC 標靶的維恩圖。 (B) 9個常見標靶的KEGG路徑富集分析Circos圖。 (C) 九個共同目標和 ACDP 活性成分的網絡。 (D)詹奎酸E與PIK3CA(PDB:6PYS)的三維結合模式與二維結合模式。 (E) 靈芝醇 B 和 CDK1 的三維和二維結合模式 (PDB: 4YC3)。

圖 7

ACDP 抑制增殖. ..

圖7

ACDP 透過PI3K/AKT/細胞週期軸抑制體外HCC 細胞的增殖。通過PI3K/AKT/細胞週期軸。 (A)-(C) CCK-8 用於檢測 HCC 細胞的活力，在含有 0、0.4、0.8、1.6、3.2 mg/mL ACDP 的培養基中培養 24 和 48 小時。數據表示為平均值±SD，*P < 0.05，*P≤ 0.01 且 ****P < 與對照組相比為0.001。 (D) ACDP 對 HCC 細胞增殖影響的集落形成實驗 (n = 6)。 (E)-(G) EdU 測定以 3.2 mg/mL ACDP 或 DMSO（對照）處理 24 小時的 HCC 細胞的增殖。條 = 25 μm。 (H) Huh-7 細胞中細胞週期蛋白E1、CDK1、cleaved-caspase 8、PIK3CA、p-AKT1 和AKT1 表達的蛋白質印跡和光密度分析，在含有3.2 mg/mL ACDP 或DMSO 的培養基中培養24小時*P < 0.05，***P≤ 與對照組相比為0.001。

圖 8

ACDP 抑制腫瘤生長

圖8

ACDPs 抑制腫瘤生長並下調細胞週期相關蛋白的表達...

圖8 ACDPs 抑制腫瘤生長並下調細胞週期相關蛋白的表達HCC異種移植小鼠中的週期相關蛋白。 (A)和(B)各組小鼠及其對應移植腫瘤的影像。 (C) ACDP 對 HCC 同種異體移植小鼠腫瘤重量的影響 (n = 5)。 ＊P≤ 0.05，*P≤ 與模型組相比為0.01。 (D) ACDP 對 HCC 同種異體移植小鼠腫瘤體積的影響 (n = 5)。 ＊P≤ 0.05，*P≤ 0.01 且 ****P < 與模型組相比為0.001。 (E) 對HCC 同種異體移植小鼠模型和ACDP 組(n = 5) 的腫瘤組織中細胞週期蛋白E1、CDK1、cleaved-caspase 8、PIK3CA、p-AKT1 和AKT1 的表達進行免疫組織化學分析。 ＊P≤ 0.05，*P≤ 0.01 且 ****P < 與模型組相比為0.001。條 = 50 μm。 所有人物 (9)