牛樟芝賦予缺乏瘦素的肥胖小鼠抵抗肥胖並恢復腸道屏障的完整性

摘要

肥胖與代謝紊亂有關。因此，肥胖的預防和治療對於健康至關重要。牛樟芝（AC）是一種多功能藥用真菌，用於治療多種疾病和預防飲食引起的肥胖。瘦素缺乏會導致暴飲暴食和自發性肥胖。伴隨的代謝症狀比飲食引起的肥胖更嚴重。在這裡，我們使用瘦素缺陷（ob/ob）小鼠作為過度餵食的動物模型來研究AC對肥胖的影響。我們用AC 餵養C57BL/6 小鼠（WT，ob+/+）和ob/ob 小鼠四個星期，然後進行qRT-PCR 和免疫印跡分析以詳細說明AC 調節機制。此外，我們使用Caco-2細胞作為人類腸上皮屏障模型來檢查AC對腸通透性的影響。我們的結果表明，AC 透過促進脂質代謝和抑制 ob/ob 小鼠的脂肪生成相關基因和蛋白質來減少肝臟和附睪白色脂肪組織 (EWAT) 的脂質沉積。此外，AC 有效修復了瘦素缺乏引起的腸道屏障損傷，增強了 Caco-2 細胞腸道屏障的完整性。有趣的是，AC 顯著降低了 ob/ob 小鼠的體重和 EWAT，且食物攝取量沒有受到影響。因此，AC 有效減少了瘦素缺乏引起的肥胖，並有可能用作治療肥胖的營養藥物。 / 12/ Nutritions-12-00726-g001.jpg" alt="圖1" />

圖1

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AC 降低了 ob/ob 小鼠的體重。 ( A ) 體重...

圖 1 AC 降低了 ob/ob 小鼠的體重。 (A) 每週測量飼餵含或不含 AC 飲食的 4-5 週齡 ob+/+ 和 ob/ob 的體重，持續 4 週。 (B) 4週後(T4)測量餵食或不餵食AC的ob+/+和ob/ob的體重。 (C–F) 在 T0 和 T4 時使用代謝籠監測每日食物或水攝取量以及糞便或尿液重量。所有數據均表示為平均值±SEM，*p＜0。 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001。不顯著； ns。每組 n = 5–14 隻小鼠。

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AC 可能抑制肝臟中的脂質累積和沈積，EWAT 則...

圖2 AC 可能抑制脂質積累和沈積ob/ob 小鼠肝臟和 EWAT 中的沉積。 (A,B) 將ob+/+ 和ob/ob 小鼠飼餵或不飼餵後，肝臟或附睪白色脂肪組織(EWAT) 重量的百分比標準化為體重交流4週。 (C,E) 使用蘇木精和伊紅染色檢查肝臟和 EWAT。 (D,F) 使用 ImageJ 軟體估計每個視野的肝臟或 EWAT 細胞的數量。放大倍率，100×。肝臟的比例尺為 20 μm，EWAT 的比例尺為 50 μm。所有數據均表示為平均值±SEM，*p＜0。 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001。不顯著； ns。每組 n = 4-14 隻小鼠。

圖3

< p> AC 減少肝臟脂肪生成並...

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AC 透過調節相關基因或蛋白質來減少肝臟脂肪生成並增加糖質新生...

圖3 AC 減少肝臟脂肪生成並透過調節 ob+/+ 和 ob/ob 小鼠的相關基因或蛋白質來增加糖質新生作用。 (A) 比較 ob+/+Ctrl 或 ob/ob-Ctrl 小鼠之間 CD36、PPARγ、ME1 和 SCD1 的相對 mRNA 表現。 (B,D) 參與脂肪生成、β-氧化和糖異生的蛋白質的免疫印跡分析。 (C,E) ob+/+-Ctrl 和 ob/ob-Ctrl 小鼠之間蛋白質表現的定量和比較。所有數據均表示為平均值±SEM，*p＜0。 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001。不顯著； ns。每組 n = 4-8 隻小鼠。所有實驗重複三次。

圖4

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AC 促進ob+/+ 和... 的EWAT 中脂解相關蛋白的表達

圖4 AC 促進ob+/+ 和 ob/ob 小鼠 EWAT 中脂解相關蛋白的表達。 (A) 脂肪分解途徑蛋白的免疫印跡分析。 (B) ob+/+-Ctrl 或 ob/ob-Ctrl 小鼠中蛋白質表現的定量和比較。所有數據均表示為平均值±SEM，*p＜0。 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001。不顯著； ns。每組 n = 4-8 隻小鼠。所有實驗重複三次。

圖 5

< p> 腸道屏障得以維持…

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ob/ob 小鼠的腸道屏障由AC 維持。 ( A )…

圖 5 ob/ob 小鼠的腸道屏障由 AC 維持。 (A) ob+/+-Ctrl 與 ob/ob-Ctrl 小鼠之間緊密連接蛋白和 CD36 的相對 mRNA 表現量； (B) 使用蘇木精和伊紅染色以及 CD36 的免疫組織化學染色檢查腸道。放大倍率，40×。比例尺為 20 μm。免疫組化陰性對照已標記為NC； (C) 使用 ZO-1 免疫組織化學染色檢查腸道。放大倍率，40×和100×；比例尺分別為 50 μm 和 10 μm。所有數據均表示為平均值±SEM，*p＜0。 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001。不顯著； ns。每組 n = 4-8 隻小鼠。

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EEAC 降低Caco-2 細胞屏障模型中的腸道通透性。 ( A )…

圖 6 EEAC 降低 Caco-2 細胞屏障模型中的腸道通透性。 (A) 以 0-3000 μL/mL EEAC 處理的 Caco-2 細胞的細胞活力測定。 (B) 使用跨上皮電阻 (TEER) 測定法測量 EEAC 對腸道通透性的影響。 (C) 使用對照 (Ctrl) 比較緊密連接蛋白和 PPARγ 的相對 mRNA 表現。 (D) 用或不用 EEAC 處理的 Caco-2 細胞的 ZO-1（綠色）的免疫螢光染色。細胞核以 DAPI（藍色）染色。陰性對照標記為 NC。比例尺，20 μm。所有數據均表示為平均值±SEM，*p＜0。 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001。不顯著； ns。所有實驗重複三次（n = 3）。