牛樟芝多醣透過ROS/TLR4/NF-κB訊號改善肝損傷的發炎反應

摘要

牛樟芝多醣（ACP）是指從天然多孔真菌牛樟芝中提取的多醣。本研究探討了 ACP 保護肝臟的作用機轉。結果表明，ACP 抑制 LPS 誘導的 KC 細胞活化，減少發炎因子的表達，增加 SOD 水平並抑制 ROS 表達。此外，採用N-乙醯半胱氨酸（NAC）進行預處理以抑制ROS。結果表明，NAC與ACP協同發揮作用，提示ACP透過抑制ROS發揮作用。進一步檢測發現ACP啟動了Nrf2訊號。在小鼠模型中發現，ACP可有效改善小鼠肝損傷，降低ALT和AST水平，抑制發炎因子的表達。本研究提示ACP可透過Nrf2-ARE訊號發揮抗氧化壓力作用，進一步提高ROS的產生和TLR4-NF-κB訊號的激活，保護肝臟免受肝損傷。

圖1

< p> ACP 對…的影響

圖1

ACP 對KC 活化的影響（n = 3）。 (A,…

圖1 ACP對KCs活化的影響(n = 3)。(A,B)細胞凋亡檢測結果。LPS促進KCs發炎損傷，增加細胞凋亡率，而ACP以劑量依賴性方式抑制細胞凋亡，與DMSO 相比，高劑量ACP 產生更明顯的效果（C-E）。並降低了發炎因子的水平。 x±s，n = 3）。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS 相比

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ACP 對...的影響

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ACP 對KC 活化中ROS-TLR4/NFκB 訊號的影響（... > 圖 2 ACP 對 KC 活化中 ROS-TLR4/NFκB 訊號的影響 (n = 3) 透過 DHE 探針檢測到 ROS 表達，活化 ROS 表達並顯著增加螢光強度。 ，且螢光強度與LPS相比顯著減弱。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS相比。 (C,D)蛋白表現檢測結果。 LPS活化TLR4/NFκB訊號，顯著上調TLR4和p-IкB表達，而ACP則抑制TLR4和p-IкB表達。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS 相比

圖3

協同作用的效果...

圖3

NAC 與ACP 協同作用抑制KC ROS 的效果...

圖3效果NAC 與 ACP 抑制 ROS 對 KC 活化的協同作用 (n = 3)。 (A、B)細胞凋亡檢測結果。 NAC與ACP協同抑制KCs的發炎損傷，降低細胞凋亡率。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS相比。 (C-E) 發炎因子的表達和釋放。 LPS促進KCs中IL-1β、IL-18和TNF-α的表達和釋放，NAC與ACP協同降低發炎因子表達。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS相比。 (F,G)SOD和MDA檢測結果。 LPS下調SOD表現並增加MDA水平，而NAC+ACP顯著增加SOD水平並降低MDA表現。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS 相比

圖4

ACP 對ROS-TLR4/NFκB 的影響…

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ACP 對KC 活化中ROS-TLR4/NFκB 訊號的影響( n = 3 )....

圖 4 ACP 對 KC 活化中 ROS-TLR4/NFκB 訊號的影響 (n = 3)。 （A，B）DHE 檢測到的 ROS 表現（x±s，n = 3）。 NAC抑制ROS表達，NAC+ACP進一步抑制ROS表達並發揮協同作用。與LPS相比，螢光強度顯著降低。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS相比。 (C,D)蛋白表現檢測結果(x±s,n=3)。 LPS組TLR4和p-IкB的表達顯著上調，而NAC+ACP則抑制TLR4和p-IкB的表達。 *p＜ 0.05，與DMSO相比； #p < 0.05，與LPS 相比

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ACP 活化Nrf2 訊號發揮抗ROS 作用的機制（...

圖5

ACP 活化Nrf2 訊號發揮抗ROS 作用的機制（. ..

圖5 ACP 活化 Nrf2 訊號發揮抗 ROS 作用的機制 (A) BCI 活化 Nrf2 抑制 ROS 表達，與 LPS 相比，螢光強度顯著降低。 0.05，與LPS相比； #p < 0.05，與 BCI 相比。 (B)以免疫螢光染色檢測Nrf2表現。 LPS活化Nrf2的表達，而BCI和ACP則進一步促進NRf2的表達並改善其核轉位。 (C,D)蛋白表現檢測結果。 BCI 活化 Nrf2 訊號，並上調 Nrf2 和 Keap1 的表達。同樣，ACP也活化Nrf2表達，其效果與BCI相當。 *p＜ 0.05，與LPS相比； #p < 0.05，與BCI 比較

圖6

ACP 對肝臟的影響…

圖 6

ACP 對小鼠肝損傷的影響。 (A) H&E 染色和免疫組織化學…

圖 6 ACP 對小鼠肝損傷的影響。 (A) 小鼠肝組織的 H&E 染色和免疫組織化學染色 (n = 5)。 Control組NLRP3表現呈陰性，D/L組NLRP3表現上調，ACP抑制NLRP3表現。 H&E染色顯示，D/L組小鼠肝組織出現嚴重發炎和水腫，與對照組相比差異有顯著性，而ACP改善了發炎反應和水腫。 (B、C) 小鼠中 ALT 和 AST 的表達 (n = 10)。 D/L小鼠週邊血液中ALT、AST表現顯著上調，顯著高於對照組。 ACP介入下調了ALT和AST水平，且高劑量ACP的效果優於低劑量ACP。 *p＜ 0.05，與對照組比較； #p < 0.05，與D/L 組比較
< p > 圖 7

對…中蛋白質表現的影響

圖 7

對小鼠肝組織中蛋白質表現的影響 (n = 3)。 TLR4…

圖 7 對小鼠肝組織蛋白質表現的影響 (n = 3)。 D/L組TLR4和I-κB表現顯著升高，高於Control組。 ACP 幹預抑制蛋白表達，抑制 TLR4 和 I-κB 表達，活化 Nrf2 訊號，並上調 Nrf2 和 keap1 蛋白質水平。 *p＜ 0.05，與對照組比較； #p < 0.05，與D/L組比較 所有數字（7）