牛樟芝純化高分子多醣體對樹突細胞功能及DNA疫苗的佐劑作用
圖
圖 1. hmwPS是主要的…
圖1。
DC 是...
圖 1。 如圖所示，以 PBS（對照）、LPS (100 ng/mL) 或各種劑量的 AC PS 處理 DC。 24小時後收集上清液（TNF-α為6小時）。以ELISA測定TNF-α、IL-6和IL-12的量。 (A) 粗 AC PS 在第一次水萃取中的效果。 (B) 不同分子量的 AC PS 各組分的影響。 (C) hmwPS 分數的影響。顯示的數據是三個樣本的平均值+SD。 NSp＞0.05； *p＜0.05（Mann-Whitney U檢定）是LPS或AC PS處理的DC與PBS處理的DC之間的比較。所有結果均代表三到四次獨立實驗。
圖 2. 交流 hmwPS 促進直流成熟。
圖 2. AC hmwPSs 促進 DC 成熟。
DC 以 PBS（對照）或 AC 處理...
圖 2。 DC 以 PBS（對照）或 AC hmwPS（5 或 10 μg/mL）處理 16 小時。以免疫染色和流式細胞儀測定 MHC I 類和 II 類、CD40、CD80 和 CD86（灰色填充區域）的表達。顯示的所有數據均針對 CD11c+ 細胞進行門控。黑線代表用同種型匹配的對照抗體進行的染色。每張圖中的表現量表示為平均螢光強度（MFI）。所有結果均代表三到四次獨立實驗。
圖 3.AC hmwPSs 活化人類 MoDC。
圖 3.AC hmwPSs 活化人類 MoDC。
人類 MoDC 是從 PBMC 產生並進行處理的…
圖 3.AC hmwPSs 活化人類 MoDC。 人類 MoDC 由 PBMC 產生，並以 PBS（對照）或 AC hmwPS（5 或 10 μg/mL）處理。 (A) 24小時後，收集上清液。以ELISA測定IL-6和IL-12的量。數據以三個樣本的平均值+SD 表示。 *p＜0.05（曼-惠特尼U檢定）是AC hmwPS處理和PBS處理的MoDC之間的比較。 (B) 16小時後，以免疫染色和流式細胞儀測定CD40、CD83和HLA-DR（灰色填充區域）的表達。顯示的所有數據均針對 CD1a+ 細胞進行門控。黑線代表用同種型匹配的對照抗體進行的染色。表達水平在每張圖中表示為MFI。所有數據均代表來自不同供體的細胞的五次獨立實驗。
圖 4. 交流 hmwPS 促進直流感應T …
圖4.AC hmwPS 促進DC 誘導的T 細胞活化和Th1 分化。
OT-I 或-II T…
圖 4. AC hmwPS 促進 DC 誘導的 T 細胞活化和 Th1 分化。 OT-I 或-II T 細胞與經PBS（白條）或AC hmwPS 處理（10 μg/mL，黑條）的DC 共培養，並以OVA257–264（對於OT-I）或OVA323–339（對於OT- I）進行脈衝。 (A) 3 天後以 3 H-胸苷摻入測定 T 細胞增殖。 (B) 4 天後從培養物中收集上清液。以 ELISA 測量 IFN-γ 的產生。數據為三個樣本的平均值+SD。 NSp＞0.05(Mann-Whitney U檢定)是AC hmwPS處理的DC和PBS處理的DC之間的比較。所有結果均代表三個獨立實驗。
圖 5. MAPK 與 NF- 的激活κB…
圖5. DC 中AC hmwPS 活化MAPK 和NF-κB。
收集 DC...
圖 5. AC hmwPS 在 DC 中活化 MAPK 和 NF-κB。 收集 DC 並以 AC hmwPS (10 μg/mL) 處理。在指定時間點添加裂解緩衝液以獲得全細胞裂解物或核提取物。 (A) 以蛋白質印跡法測定 MAPK 的活化。將全細胞裂解物與針對 ERK、JNK 和 p38 MAPK 磷酸化蛋白的抗體一起孵育，然後以特異性二抗和 ECL 系統進行檢測。顯示了上樣對照，並代表針對這些 MAPK 總蛋白的抗體的使用。數據代表三個獨立實驗。 (B) 以 p65 結合測定測定 NF-κB 的活化。使用 TransAM NF-κB p65 ELISA 試劑盒測量核萃取物中的 NF-κB 結合活性，並顯示為 OD450 處的讀數值。數據為三個樣本的平均值+SD。 NSp＞0.05(Mann-Whitney U檢定)是LPS或AC hmwPS處理的DC與PBS處理的DC之間的比較。所有結果均代表三個獨立實驗。
圖 6. TLR2 與 TLR4 參與其中…
圖6. TLR2 和TLR4 參與AC hmwPSs 對DC 的活化。
DC 是...
圖 6。 DCs由(A)C3H/HeN和C3H/HeJ(TLR4突變體)或(B)C57BL/6和TLR-2 KO小鼠產生，然後用PBS(對照)、LPS(100ng/mL)、 LTA (1 μg/mL) 或AC hmwPSs (10 μg/mL)。 24小時後收集上清液。以ELISA測定IL-6和IL-12的濃度。顯示的數據是三個樣本的平均值+SD。 NSp＞0.05； *p＜0.05（Mann-Whitney U檢定）是LPS-、LTA-或AC hmwPS處理的DC與PBS處理的DC之間的比較。所有結果均代表三個獨立實驗。
圖 7. AC hmwPS 促進 DC 活化…
圖7.AC hmwPSs 促進體內DC 活化。
CD11c + DCs 分離自…
圖 7.AC hmwPSs 促進體內 DC 活化。 6小時後，腹腔注射PBS（對照）或AC hmwPS（5或10μg/小鼠）的小鼠的引流淋巴結和脾臟中分離出CD11c+ DC。 (A)以免疫染色和流式細胞儀測定CD40、CD86和MHC II類(灰色填充區域)的表達。黑線代表用同種型匹配的對照抗體進行的染色。表達水平在每張圖中表示為MFI。 (B) 以定量即時 PCR 測定 IL-12 的量。 *p＜0.05（Mann-Whitney U檢定）是AC hmwPS處理的小鼠和PBS處理的小鼠之間的比較。所有結果均代表三到四次獨立實驗。
圖8.AC hmwPSs 增強了治療效果……
圖8. AC hmwPSs 增強HER-2/neu DNA 疫苗對小鼠腫瘤的治療效果…
圖8. AC hmwPSs 增強HER-2/neu DNA 疫苗對小鼠腫瘤的治療效果小鼠腫瘤模型。 如材料與方法所述，將表達p185neu的MTB-2細胞接種到小鼠中。十天後，如圖所示，以 HER-2/neu DNA 疫苗或合併 AC hmwPS 的疫苗治療荷瘤小鼠。顯示的數據是每組六到七隻小鼠的平均值±標準差。 (A) 接種疫苗後小鼠腫瘤生長曲線。在指定日期按照材料和方法部分中的描述計算腫瘤體積。 *p<0.05，**p<0.01（Mann-Whitney U 檢定）是所有疫苗接種和單獨載體之間的治療比較。 (B) 接種後小鼠 (N = 5) 的 Kaplan-Meier 存活曲線。 *p＜0.05是HER-2/neu DNA疫苗和單獨載體之間的治療比較。 ##p＜0.05是HER-2/neu DNA疫苗+AC hmwPS和HER-2/neu DNA疫苗之間的治療比較。所有結果均代表三個獨立實驗。
圖 9. AC hmwPSs 極化 Th1…
圖9.AC hmwPSs 使HER-2/neu DNA 疫苗接種誘導的Th1 反應極化。
荷瘤…
圖 9.AC hmwPSs 使 HER-2/neu DNA 疫苗接種誘導的 Th1 反應極化。 荷瘤小鼠接受 AC PS、HER-2/neu DNA 疫苗或所示組合治療 6 天。然後，從各種接種疫苗的小鼠中分離總腹股溝淋巴結細胞，並與重組 HER-2/neu 蛋白（10 μg/mL）一起孵育 16 小時。 (A) 以細胞內染色和流式細胞儀檢測刺激的 CD8+ T 細胞產生的 IFN-γ。每張圖中顯示了 CD8+IFN-γ+ 細胞佔總 CD8+ T 細胞的百分比。 (B) 從總 LN 細胞中純化 CD4+ T 細胞。以定量即時 PCR 測定刺激的 CD4+ T 細胞產生的 IFN-γ 和 IL-4。將數據標準化為每個樣本中的 HPRT 表達，並顯示為五隻小鼠的平均值 + SD。 *p<0.05（Mann-Whitney U 檢定）是 HER-2/neu DNA 疫苗和對照組之間的治療比較。 NSp＞0.05； ##p＜0.05是HER-2/neu DNA疫苗+AC hmwPS與單獨的HER-2/neu DNA疫苗之間的治療比較。所有數據均代表三個獨立實驗。 所有人物 (9)