從牛樟芝中分離出的 Antrodin C 透過 ROS/AKT/ERK/P38 訊息傳遞路徑和 TNFα 的表觀遺傳組蛋白乙醯化誘導大腸直腸癌細胞凋亡

摘要

數字

圖1

高效液相層析分析...

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高效能液相牛樟芝菌絲體乙醇萃取物的色譜分析。保留…

圖1 牛樟芝菌絲體乙醇萃取物的高效液相層析分析。生物反應器中 antrodin C 的保留時間峰值為 4.556 分鐘（UV 檢測為 254 nm）。

圖2

< p> Antrodin C (ADC) 降低細胞…

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Antrodin C (ADC) 降低DLD-1 和HCT-116 細胞的細胞活力。 ( A…

圖 2 Antrodin C (ADC) 降低 DLD-1 和 HCT-116 細胞的細胞活力。(A) 細胞用 0.1 % DMSO（作為對照）或ADC 24 小時，並進行MTT 測定以分析其細胞活力(B) 對處理的CRC 細胞進行DAPI 染色以分析凋亡細胞（紅色箭頭）。 ，數據表示為三個重複實驗的平均值±SD。 ADC) 誘導細胞…

圖 3

Antrodin C (ADC) 誘導細胞凋亡與活性氧(ROS)/Ca2+ 產生…

圖3 Antrodin C (ADC ) 誘導細胞凋亡和活性氧(ROS)/Ca2+ 產生HCT-116 細胞中的產量以及粒線體電位降低和細胞週期 G1 停滯。 ADC 處理後，HCT-116 細胞以 FITC 結合的膜聯蛋白-V 和碘化丙啶 (PI) 進行染色分析。單獨處理後，顯示凋亡細胞的百分比。以 FACS 分析測量 ADC 處理細胞的細胞內 ROS/Ca2+。 ROS/Ca2+ 產量表示為對照組的倍數變化。以 JC-1 染料對 ADC 處理的細胞進行染色以進行流式細胞儀分析。 ADC 檢測到的綠色/紅色螢光強度比的降低表明膜滲透性 ADC 在粒線體中表現出電位依賴性累積。流式細胞儀結果顯示參與每個細胞週期階段（G1、S 和 G2/M）的細胞數量百分比。數據以平均值±標準差的形式呈現在三個獨立實驗的清單中。

圖4

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圖4

Antrodin C (ADC) 抑制體內CRC 細胞的增生...

圖4 Antrodin C ( ADC) 在體內異種移植小鼠模型中抑制CRC 細胞的增生。將每種指定的 HCT-116 細胞係以 106 個細胞/小鼠皮下注射到裸鼠中。左圖顯示了植入結直腸癌細胞（無論是否接受 ADC 治療）的裸鼠的代表性圖像。右圖：癌細胞植入後，在有或沒有ADC治療的情況下，每隔0、7、10、14和18天測量體重、腫瘤體積和腫瘤重量。定量數據測定為平均值±SD。 （n = 6/組）。 * p < 0.05。

圖 5

< p> Antrodin C (ADC) 改變增殖...

圖5

Antrodin C (ADC) 改變CRC 細胞中的增殖和凋亡蛋白表達...

圖5 Antrodin C (ADC) 改變體內異種移植小鼠模型中 CRC 細胞的增殖和凋亡蛋白表現。對裸鼠腫瘤進行蘇木精和伊紅染色（第一行，上圖）。 PCNA（第2 行，上圖）、細胞週期蛋白D1（第3 行，上圖）、細胞週期蛋白E（第5 行，上圖）、MMP-9（第6 行，上圖）和TNFα（第7 行，上圖）的蛋白質水平小組）透過使用免疫組織化學分析進行檢測。右圖：透過計算平均積分光密度 (AIOD)，評估 PCNA、細胞週期蛋白 D1、細胞週期蛋白 E、MMP-9 和 TNFα 蛋白的定量測定。對多個腫瘤野及其陽性染色區域進行評估，然後透過隨機選擇每個切片的三個觀察野進行評估（n = 6/組）。數據表示為平均值±標準差。 * p < 0.05，放大倍率×200。圖6

antrodin C 的作用…

圖 6

antrodin C (ADC) 對細胞死亡和細胞週期相關蛋白的作用，以及… 圖6 antrodin C (ADC) 對HCT-116 細胞中細胞死亡和細胞週期相關蛋白以及ERK/AKT/p38 MAPK 路徑的影響。 (A,B) Bcl-2、Bax、caspase-3、caspase-9、cyclin D1、CDK2、cyclin E、TNFα、ERK、AKT 蛋白濃度和p38在ADC 處理的HCT-116 細胞中使用蛋白質印跡法測定。雖然 β-肌動蛋白用作內部對照，但使用光密度分析來量化蛋白質水平，對照為 100%。數據表示為三個獨立實驗的平均值±SD。 * p <與對照組相比，0.05。

圖7

< p> 激酶抑制劑阻斷...

圖7

激酶抑制劑阻斷腫瘤壞死因子(TNF) 啟動子的結合活性...

圖7 激酶抑制劑阻斷antrodin C 處理誘導的腫瘤壞死因子 (TNF) 啟動子區域的結合活性。使用沉澱DNA 中針對組蛋白H3K9K14ac（乙醯Lys9/Lys14）和TNFα 啟動子（-118 個目標位點，如材料和方法中所述）的抗體進行染色質免疫沉澱測定，並透過定量即時聚合酶鏈進行擴增使用特定引子組進行反應。將 HCT-116 細胞與或不與活性氧 (ROS) 清除劑、特異性 ERK1/2 MAPK 抑制劑 PD98059、PI3K/AKT 抑制劑渥曼青黴素或 p38 MAPK 抑制劑 SB203580 在不同濃度下孵育 24 小時。數據以三個獨立實驗的平均值±SD 表示。 * p < 0.05，與對照組比較。

圖8

< p> 分子示意圖...

圖8

antrodin-C 介導的結直腸癌凋亡誘導分子機轉示意圖...

圖8 示意圖antrodin- C 介導的大腸直腸癌(CRC) 細胞凋亡誘導的分子機制。 Antrodin C 治療透過 ROS 衍生和 ERK/AKT/p38 MAPK 訊號通路介導的組蛋白 H3K9K14ac（乙醯 Lys9/Lys14）增加死亡受體腫瘤壞死因子 (TNF)α 的表達。 antrodin C 會活化 TNFα，透過抑制 Bcl-2 和活化 Bax、caspase-3 和 -9 來觸發細胞凋亡。另一方面，antrodin C 處理也透過下調 HCT-116 細胞中的細胞週期蛋白 D1/細胞週期蛋白 E 導致細胞週期停滯在 G1 期。 所有人物 (8)