從牛樟芝菌絲體中提取的三萜類化合物可透過抑制發炎反應減輕 C57BL/6 小鼠急性酒精性肝損傷

摘要

過量飲酒會導致肝臟損傷引起的死亡。在此，我們系統分析了牛樟芝菌絲體（ACT）中提取的三萜類化合物的結構，並研究了其對小鼠急性酒精性肝損傷的保護作用。採用液相層析質譜聯用技術和液相層析-串聯質譜聯用技術確定了 ACT 成分的結構。以口服 13 g/kg 白酒（酒精濃度為 56% 的葡萄酒）對 C57BL/6 小鼠造成酒精誘導的肝損傷。小鼠接受水飛薊賓或 ACT 治療 2 週。接著透過酵素連結免疫吸附測定、抗體陣列測定和蛋白質印跡對肝損傷標記和病理訊號進行定量，並使用蘇木精-伊紅染色和高碘酸-希夫染色進行病理檢查。從A中提取的三萜類化合物。肉桂菌絲體含有25種三萜類化合物。兩週的飲酒治療導致體重顯著減輕、肝臟血脂異常以及血清和/或肝臟中丙氨酸轉氨酶、天冬氨酸轉氨酶、γ-谷氨酰轉移酶和鹼性磷酸酶活性升高。服用 ACT 兩週後，這些影響明顯逆轉。從A中提取的三萜類化合物。肉桂菌絲體減輕了酒精損傷組織的器官結構變化和發炎浸潤。從A中提取的三萜類化合物。肉桂菌絲體抑制促發炎細胞因子水平並增強抗發炎細胞因子水平。急性酒精治療促進炎症，與缺氧誘導因子1α (HIF-1α) 顯著相關，ACT 可以減少缺氧誘導因子1α (HIF-1α)，部分與蛋白激酶B (Akt)/70-kDa 核醣體蛋白S6 激酶磷酸化(p70S6K) 的調節有關) 和 Wnt/β-catenin 訊息傳遞路徑。總之，ACT 主要透過抑制發炎反應來預防小鼠急性酒精性肝損傷，這可能與 HIF-1α 訊號傳導有關。 /upload/2024/12/fmicb-11-01113-g0001.jpg" alt="圖1" />

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總離子流圖ACT…

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透過LC-MS 獲得的ACT 總離子色譜圖。 ACT，從…分離出的三萜類化合物

圖 1 透過 LC-MS 獲得的 ACT 總離子流層析圖。 ACT，從肉桂菌絲體分離出來的三萜類化合物。

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ACT 治療可減少肝損傷標記和脂質異常。小鼠接受治療…

圖 2 ACT 治療可降低肝損傷標記和脂質異常。小鼠接受 ACT 治療 14 天，並透過酵素連結免疫吸附測定對其肝損傷標記進行定量。 (A) 實驗方案與給藥。 (B–F)血清和肝臟中(B,C)丙胺酸轉氨酶和(D,E)天門冬胺酸轉氨酶水平分別和(F) γ-谷氨酰轉移酶、(G)鹼性磷酸酶、(H)三酸甘油酯、 的水平(I) 肝臟中的總膽固醇和(J) 低密度脂蛋白。數據表示為平均值±SD (n = 8)，並使用參數檢定的單向變異數分析進行分析。 #P < 0.05 且 ###P < 0.001 與對照組比較； *P＜ 0.05，**P＜0.05 0.01，且***P＜0.01 0.001 與模型組相比。 ACT，從肉桂菌絲體中分離出的三萜類化合物；西爾，水飛薊賓。

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< p> ACT 治療減輕結構器官...

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ACT 治療減輕結構器官變化和肝細胞凋亡。組織病理學分析...

圖 3 ACT 治療可減輕結構器官變化和肝細胞凋亡。 (A)肝臟、(B)腎臟、(D)脾臟和(E) 心臟經由H&E 染色，(C) 腎臟經由PAS 染色（比例尺100 μm；放大倍率× 400）。 ACT，從肉桂菌絲體中分離出的三萜類化合物； Sil，水飛薊賓； H&E、蘇木精和曙紅； PAS，高碘酸-希夫。

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< p> 抗體陣列測定。效果...

圖 4

抗體陣列測定。 ACT 和 Sil 對 111 種細胞激素的影響...

圖 4 抗體陣列測定。使用 Proteome Profiler Mouse XL 細胞激素陣列試劑盒 (n = 3) 檢測 ACT 和 Sil 對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟中 111 種細胞激素的影響。 (A) 陣列圖代表細胞激素的表達。 (B) 111種細胞激素的散佈圖。相對密度是絕對值與參考點值的比值。紅點表示經由酵素連結免疫吸附測定驗證的蛋白質。 ACT，從肉桂菌絲體中分離出的三萜類化合物；西爾，水飛薊賓。 ① RANTES，調節正常T細胞表現和分泌的活化； ② YKL-40、人類軟骨糖蛋白39； ③CXCL13，趨化因子（C-X-C基序）配體13； ④ ICAM-1，細胞間黏附分子1； ⑤ IFN-γ、幹擾素γ； ⑥ IL-1α、白血球介素1α； ⑦ IL-7、白血球介素7； ⑧ IL-22、白血球介素22； ⑨ IL-23、白血球介素23； ⑩ IL-33、白血球介素33； ⑪ NGAL，嗜中性球明膠酶相關脂質運載蛋白； ⑫ RBP4，視黃醇結合蛋白4； ⑬ P-選擇素； ⑭ PAI-1，纖溶酶原激活劑抑制劑1； ⑮ TPO，血小板生成素； ⑯ TNF-α、腫瘤壞死因子α； ⑰ VCAM-1、血管細胞黏附分子1； ⑱ VEGF，血管內皮生長因子。

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< p> ACT 治療透過...調節HIF-1α

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ACT 治療透過肝臟中的Akt/p70S6K 和Wnt/β-catenin 訊號傳導調節HIF-1α，並且...

圖 5 ACT 治療透過肝臟和脾臟中的 Akt/p70S6K 和 Wnt/β-catenin 訊號傳導調節 HIF-1α。 14天ACT給藥調節肝臟中Akt、mTOR、GSK-3β、p70S6K和β-catenin的磷酸化程度以及Wnt 1、Wnt3和HIF-1α的表達量(A) 和急性酒精損傷小鼠的脾臟(B)。透過相關總蛋白表現和/或 GAPDH 表現對定量的蛋白質表現進行標準化。數據表示為平均值±SD (n = 3)，並使用參數檢定的單向變異數分析進行分析。 #P < 0.05且##P＜ 0.01 與對照組相比； *P＜ 0.05，**P＜0.05 0.01，且***P＜0.01 0.001 與模型組相比。 ACT，從肉桂菌絲體中分離出的三萜類化合物； Sil，水飛薊賓； Akt，蛋白激酶 B； mTOR，雷帕黴素的哺乳動物標靶； GSK-3β，肝醣合成酶激酶 3β； p70S6K，70-kDa 核醣體蛋白 S6 激酶； GAPDH，3-磷酸甘油醛去氫酶。