4-Acetylantroquinonol B 破壞 β-Catenin/TCF-1/STAT3 訊號軸可抑制體外和體內膠質母細胞瘤細胞的腫瘤發生和癌症幹細胞樣特性

摘要

數字

圖1

β-catenin 的異常表達是…

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β 的異常表達β-連環蛋白是膠質母細胞瘤(GBM) 的特徵，與不良預後相關。 。 (A) Kaplan-Meier 圖顯示癌症基因組圖譜(TCGA) 低度膠質瘤和膠質母細胞瘤隊列（膠質瘤(GBMLGG)，n = 1152）根據其組織學類型的總體存活率。 (B) TCGA GBMLGG 組中不同組織學類型的神經膠質瘤和膠質母細胞瘤中 β-連環蛋白的表達。 (C) Kaplan-Meier 圖基於 TCGA GBMLGG 資料集的膠質母細胞瘤成分中的 β-連環蛋白表達水平，使用基因表達 RNAseq-IlluminaHiSeq。表達截斷基於表達中位數。 LGG，低度惡性膠質瘤； GBM，膠質母細胞瘤。

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β-catenin 促進GBM 致癌性和疾病復發，及其癌症幹...

圖2 β -連環蛋白促進 GBM 致癌性和疾病復發，及其癌症幹細胞樣特徵。 (A) 使用人類基因組U133A 陣列的TCGA 大腦資料集(n = 557)，顯示GBM (n = 547) 和正常大腦(n = 10) 樣本中β-catenin mRNA 表現的差異。 (B) 免疫組織化學(IHC) 染色比較2 名台北醫學大學雙和醫院(TMU-SHH) 腦腫瘤患者GBM、復發性和鄰近非腫瘤腦組織中β-catenin 的表達。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001； GBM，膠質母細胞瘤。比例尺：50 μm (C) GEO 資料集 GSE20736/GPL570/GDS4535 顯示，與分化細胞相比，人類 GBM 祖細胞中 β-連環蛋白表現量呈現時間依賴性增強。

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4-AAQB 破壞β-catenin/TCF-1/Stat3 訊號軸GBM細胞。 ( A ) 化學結構…

圖 3 4-AAQB 破壞 GBM 細胞中的 β-catenin/TCF-1/Stat3 訊號軸。 (A) 4-Acetylantroquinonol B 的化學結構； C26H38O7，462.58 克/摩爾。代表性蛋白質印跡數據和圖形定量顯示 (B) 人類 GBM 細胞系 U87MG 中 β-連環蛋白的敲低效率，以及對 pGSK3β、GSK-3β、TCF1/ 表達量的相應影響TCF7和LEF1 蛋白； (C) 以增加濃度的 4-AAQB 處理 24 小時後，U87MG 和 DBTRG05MG 細胞中 β-連環蛋白、pGSK3β、TCF1/TCF7、LEF1 和 p-Stat3 蛋白的劑量依賴性下調。 β-肌動蛋白作為上樣對照。 siCTNNB1，專門針對 β-catenin 的短幹擾 RNA； WT，野生型； * p＜0.05，** p＜0.01，*** p＜0.001。所有數據均代表一式三份進行 4 次的實驗。

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< p> 4-AAQB 抑制GBM 細胞核定位…

圖4

4-AAQB 抑制GBM 細胞中β-catenin、Sox2 和Oct4 的核定位…

> 圖4 4-AAQB 抑制GBM 細胞中β-catenin、Sox2 和Oct4 的核定位。使用或不使用5–10 μM 4-AAQB 處理的U87MG 和DBTRG-05MG 細胞以Sox2（綠色）、Oct4（紅色）、β-連環蛋白（紅色）和F-肌動蛋白（綠色）抗體進行免疫染色，然後進行影像視覺化和透過螢光顯微鏡進行分析。以 5 或 10 μM 4-AAQB 處理可顯著降低 (A) U87MG 或 (B) DBTRG-05MG 細胞中核 Sox2 和 Oct4 蛋白表現。 (C) 免疫組織化學顯示，用 10 μM 4-AAQB 處理後，β-連環蛋白和 F-肌動蛋白的核表達減少。原始放大倍率×200。 DAPI（藍色）作為核標記。

圖 5

< p> 4-AAQB 顯著抑制活力...

圖5

4-AAQB 顯著抑制GBM 細胞的活力和致癌性。 ( A )…

圖 5 4-AAQB 顯著抑制 GBM 細胞的活力和致癌性。 (A) 4-AAQB 對 U-87MG 和 DBTRG-05MG 細胞活力的劑量依賴性細胞毒性作用。 (B) 代表性照片影像和圖形定量顯示 5 μM 和 10 μM 4-AAQB 對 U-87MG 和 DBTRG-05MG 在 24 小時內遷移的影響。 (C) 4-AAQB 劑量依賴性地抑制侵入的 U-87MG 和 DBTRG-05MG 細胞的數量。比例尺：50 μm。 (D) Western blot檢測顯示5 M和10 M 4-AAQB對DBTRG-05MG細胞中β-catenin、vimentin和slug蛋白表現量的抑製作用。 β-肌動蛋白作為上樣對照。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001；所有數據均代表一式三份進行 4 次的實驗。

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< p> 4-AAQB 顯著抑制幹細胞…

圖6

4-AAQB 顯著抑制U87MG 和DBTRG-05MG 細胞的幹細胞樣表型。 (…

圖 6 4-AAQB 顯著抑制 U87MG 和 DBTRG-05MG 細胞的幹細胞樣表型。(A) 代表性照片影像和 (B ) 圖形定量顯示4-AAQB 顯著減少了形成的U87MG 和DBTRG-05MG 初級、次級和第三代腫瘤球的大小和數量。性照片影像。 ; –10 M 4-AAQB 處理對 DBTRG05MG 細胞中 β-連環蛋白、c-Myc、KLF4、Oct4 和 Sox2 蛋白表現量的影響，如代表性的 β-肌動蛋白數據所示。 < 0.01，*** p < 0.001；所有數據代表一式三份進行的實驗。 >與口服灌胃、腹腔注射相比…

圖7

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與口服灌胃相比，腹腔內4-AAQB 顯著且更有效地抑制GBM 幹細胞…

圖7 與口服灌胃相比，腹膜內4-AAQB 顯著且更有效地抑制GBM 幹細胞誘導的腫瘤生長，在體內。 (A) 腫瘤大小與時間曲線顯示與對照組相比，4-AAQB 透過口服或腹膜內途徑對 U87MG 腫瘤生長的抑製作用。 (B) 從體內研究中採集的腫瘤樣本的照片。 (C) 口服和腹腔注射 4-AAQB 對異種移植 GBM 原代培養物中 TCF-1 和 β-catenin 的表達和定位的不同影響。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，***p＜0.01 0.001； 4', 6'-二脒基-2-苯基吲哚 (DAPI) 用作核標記。 所有人物 (7)