Cinnamomum kanehirai Hayata 葉乙醇萃取物透過 caspase-3 級聯誘導人類肝癌細胞凋亡

摘要

誘導易感細胞凋亡是目前使用的大多數細胞毒性抗癌藥物的主要機制。 Cinnamomum kanehirai Hayata（樟科）是台灣獨特的本土樹種，是具有抗癌活性的藥用真菌牛樟芝的主要宿主。由於A. cinnamomea 的稀缺性，C. kanehirai Hayata 被用作肝癌的叉藥。在這裡，我們觀察到 C. kanehirai Hayata 乙醇萃取物可以以劑量和時間依賴性方式抑制 HepG2 和 HA22T/VGH 人類肝癌細胞系的細胞活力。根據劉氏染色的細胞形態變化、凝膠電泳的寡核小體DNA斷裂、透過檢測Annexin V的磷脂酰絲氨酸的外化和透過細胞週期分析的亞倍體群體，我們發現細胞死亡的模式是凋亡。我們的結果表明，萃取物引起 caspase-3 裂解並增加 caspase-8 和 caspase-9 的酶活性。 Caspase 3 抑制劑部分逆轉了萃取物對活力的抑製作用。此外，萃取物處理還注意到 Bax 的上調和 Bcl-2 的下調。總之，C. kanehirai Hayata 乙醇萃取物透過 caspase-3 級聯誘導人類肝癌 HA22T/VGH 和 HepG2 細胞凋亡的內在途徑，這可能為肝癌治療提供新的思路。

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不同部位的抗增殖活性...

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Cinnamomum kanehirai Hayata 葉不同部位對人體的抗增殖活性… < /p> 圖1 Cinnamomum kanehirai Hayata 葉不同組成物對人類肝癌細胞的抗增殖活性。 HA22T/VGH 細胞 (A) 和 HepG2 細胞 (B) 以 CKHE-W 或 CKHE-E (0.25–2.00 mg/mL) 處理 12、24、和48小時。然後使用MTT測定法測定細胞活力。 註：實驗重複3次。數據代表平均值±SD。 縮寫： CKHE-E，乙醇肉桂萃取物； CKHE-W，水桂香萃取物； MTT，3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑； SD，標準差； h，小時。

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CKHE-E 誘導細胞形態變化。 HA22T/VGH和HepG2人的劉氏染色形態…

圖2 CKHE-E誘導的細胞形態變化。 HA22T/VGH 和HepG2 人類肝癌細胞（A 和B）的Liu 染色形態，以及用0.5 mg/mL 處理48 小時的兩種細胞（C <分別為 /b> 和 D）。 註： DAPI染色，原始放大倍率×1,000；三角形標記代表細胞收縮；白色箭頭標記代表凋亡小體形成；比例尺，20 μm。 縮寫： CKHE-E，乙醇肉桂萃取物； DAPI，4',6-二脒基-2-苯基吲哚。

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CKHE-E 誘導人類細胞凋亡...

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CKHE-E 誘導人類肝癌細胞凋亡。 ( A ) HA22T/VGH 細胞和…

圖 3 CKHE-E 誘導人類肝癌細胞凋亡。 (A) HA22T/VGH 細胞和 HepG2 細胞以 0.5 或 1.0 mg/mL CKHE-E 處理 24 小時，並以 DNA 片段化分析進行檢查。 (B) HA22T/VGH 細胞和 HepG2 細胞分別以 0.5 或 1.0 mg/mL 的 CKHE-E 處理 24 和 48 小時。 註： 細胞凋亡百分比透過膜聯蛋白-V/PI 染色的流式細胞儀測定。實驗重複三次。 縮寫： CKHE-E，乙醇肉桂萃取物； PI，碘化丙啶； h，小時。

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CKHE-E 對細胞的影響...

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CKHE-E 對人類肝癌細胞細胞週期進展的影響。 HA22T/VGH 和…

圖4 CKHE-E 對人類肝癌細胞細胞週期進展的影響。 HA22T/VGH 和 HepG2 細胞分別以 0.5 和 1.0 mg/mL CKHE-E 處理 24 和 48 小時，並以流式細胞儀分析 PI 染色的 DNA 含量。 註：所示百分比是三個獨立實驗的平均值，每個實驗一式三份。亞G1期細胞隨時間增加。 縮寫： CKHE-E，乙醇肉桂萃取物； PI，碘化丙啶； h，小時。

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CKHE-E對人類肝癌細胞凋亡的影響…

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CKHE-E對人類肝癌細胞凋亡內在途徑的影響。 ( A…

圖5 CKHE-E對人類肝癌細胞凋亡內在途徑的影響。(A) 1.0 mg處理的HA22T/VGH和HepG2細胞/mL CKHE-E 12 和24 小時，然後收穫並裂解細胞以檢測裂解的caspase-3、Bax、Bcl-2 和β-肌動蛋白(B) HepG2。 mL CKHE-E處理細胞6、12、24和48小時，然後收穫並裂解細胞以檢測caspase-8和-9活性測定(C)。滲透性caspase-3 抑制劑(50 μM) 和CKHE-E (1 和2 mg/mL) 共孵育48 小時，透過MTT 檢查對細胞生長的影響。 100％來計算細胞增殖百分比。 *P＜0.05。 縮寫： CKHE-E，乙醇肉桂萃取物； DMSO、二甲基亞砜； MTT，3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑； SEM，平均值的標準誤差。

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CKHE-E對人類肝癌細胞凋亡的影響…

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CKHE-E對人類肝癌細胞凋亡內在途徑的影響。 ( A…

圖5 CKHE-E對人類肝癌細胞凋亡內在途徑的影響。(A) 1.0 mg處理的HA22T/VGH和HepG2細胞/mL CKHE-E 12 和24 小時，然後收穫並裂解細胞以檢測裂解的caspase-3、Bax、Bcl-2 和β-肌動蛋白(B) HepG2。 mL CKHE-E處理細胞6、12、24和48小時，然後收穫並裂解細胞以檢測caspase-8和-9活性測定(C)。滲透性caspase-3 抑制劑(50 μM) 和CKHE-E (1 和2 mg/mL) 共孵育48 小時，透過MTT 檢查對細胞生長的影響。 100％來計算細胞增殖百分比。 *P＜0.05。 縮寫： CKHE-E，乙醇肉桂萃取物； DMSO、二甲基亞砜； MTT，3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑； SEM，平均值的標準誤差。

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芝麻素、…的抗增殖活性

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芝麻素、甲基(21R)脫鎂葉綠酸a、脫鎂葉綠酸b甲基的抗增殖活性…

圖圖6 芝麻素、甲基(21R)脫鎂葉綠酸a、脫鎂葉綠酸b甲酯對HA22T/VGH和HepG2細胞的抗增殖活性。 HA22T/VGH和HepG2細胞均以不同濃度的芝麻素、甲基(21R)脫鎂葉綠酸a和脫鎂葉綠酸b甲酯在37℃處理48小時。以MTT法檢測對細胞生長的影響，以對照吸光度為100%計算細胞增殖百分比。 註：實驗重複3次。 縮寫： MTT，3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物。 所有人物 (7)