台灣樟腦酸 A、B 和 C 透過調節多重抗藥性癌細胞中的 P-糖蛋白作為細胞毒性增強劑

摘要

：由於P-糖蛋白（P-gp）相關的多重抗藥性（MDR）仍然是癌症治療中最重要的未解決問題，科學家正試圖從自然資源中尋找潛在的結構。本研究的目的是闡明台灣樟芝中的三萜類化合物是否可以透過影響 P-gp 外排泵來逆轉癌症 MDR。進行底物流出測定和P-gp ATP酶活性測定以揭示P-gp抑制的分子機制，同時進行SRB測定、細胞週期分析和凋亡分析以確認癌症MDR調節作用。結果表明，佔奎酸A、B和C（ZA-A、ZA-B和ZA-C）分別以競爭性、非競爭性和競爭性方式影響P-gp外排功能。此外，這些三萜類化合物均表現出對基礎 P-gp ATP 酶活性和維拉帕米刺激的 ATP 酶活性的抑制模式。在MDR逆轉作用方面，ZA-A使P-gp過度表現細胞株（ABCB1/Flp-InTM-293）和MDR癌細胞株（KB/VIN）對臨床使用的化療藥物（包括阿黴素、紫杉醇和長春新鹼，在所研究的三萜類化合物中表現出最佳的細胞毒性增強能力。本研究表明，來自樟腦的常見三萜類化合物ZA-A、ZA-B 和ZA-C 能夠有效調節藥物外排轉運蛋白P-gp，並逆轉癌症MDR 問題。 >圖

圖1

詹奎酸的作用...

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詹奎酸A、B和C（ZA-A、ZA-B和ZA-C）的作用... < /p> 圖1 詹奎酸A、B和C（ZA-A、ZA-B和ZA-C）對人類P-糖蛋白（P-gp）的影響。 (a) ABCB1/Flp-InTM-293 細胞株（過度表現人類P-gp）中經過或不經過ZA-A、ZA-B 或ZA-C 預處理的細胞內鈣黃綠素螢光。使用維拉帕米 5 μM 作為陽性對照。 * 表示p＜；與對照組細胞內鈣黃綠素螢光相比為0.05。 (b) ZA-A、ZA-B 或 ZA-C 對 ABCB1/Flp-InTM-293 中鈣黃綠素保留的劑量依賴性影響。 * 表示p＜；與對照組細胞內鈣黃綠素螢光相比為0.05。 (c), (d) 用 10 μM ZA-A 處理 ABCB1/Flp-InTM-293 或 KB/VIN 後，ABCB1 mRNA 表現沒有顯著差異， ZA -B 或ZA-C 72 小時。 © 10 μM ZA-A、ZA-B 或 ZA-C 處理下 P-gp 的構像不受影響。長春花鹼作為陽性對照。

圖2

< p> Lineweaver-Burk 圖分析...

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ZA-A、ZA-B 和ZA-C 對...傳輸的Lineweaver-Burk 圖分析 < / p> 圖2 ZA-A、ZA-B 和ZA-C 對人類P-gp 中羅丹明123 或多柔比星轉運的Lineweaver-Burk 圖分析。 (a) ZA-A、(b) ZA-B 和 (c) ZA-C 透過競爭性、非競爭性、和競爭機制。 (d) ZA-A、(e) ZA-B 和(f) ZA-C 透過競爭性、非競爭性和競爭性抑制阿黴素外流機制，分別。 * p <與未經 ZA-A、ZA-B 或 ZA-C 治療（對照組）的羅丹明 123 或多柔比星流出相比，為 0.05。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。

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< p> Lineweaver-Burk 圖分析...

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ZA-A、ZA-B 和ZA-C 對...傳輸的Lineweaver-Burk 圖分析 < / p> 圖2 ZA-A、ZA-B 和ZA-C 對人類P-gp 中羅丹明123 或多柔比星轉運的Lineweaver-Burk 圖分析。 (a) ZA-A、(b) ZA-B 和 (c) ZA-C 透過競爭性、非競爭性、和競爭機制。 (d) ZA-A、(e) ZA-B 和(f) ZA-C 透過競爭性、非競爭性和競爭性抑制阿黴素外流機制，分別。 * p <與未經 ZA-A、ZA-B 或 ZA-C 治療（對照組）的羅丹明 123 或多柔比星流出相比，為 0.05。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。

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< p> P-gp ATPase 調節作用...

圖3

ZA-A、ZA-B 和ZA-C 的P-gp ATPase 調節作用。 ( a )…

圖 3 ZA-A、ZA-B 和 ZA-C 對 P-gp ATP 酶的調節作用。 (a) ZA-A、(b) ZA-B 和 (c) ZA-C 以劑量依賴性方式抑制基礎 ATPase 活性趨勢。 (d) ZA-A、(e) ZA-B 和(f) ZA-C 可逆轉維拉帕米刺激的ATP酶活性。根據發光變化（ΔRLU）來分析數據。 * 表示p＜；與基礎活動組或200μM維拉帕米治療組的ΔRLU相比為0.05。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。

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< p> P-gp ATPase 調節作用...

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ZA-A、ZA-B 和ZA-C 的P-gp ATPase 調節作用。 ( a )…

圖 3 ZA-A、ZA-B 和 ZA-C 對 P-gp ATP 酶的調節作用。 (a) ZA-A、(b) ZA-B 和 (c) ZA-C 以劑量依賴性方式抑制基礎 ATPase 活性趨勢。 (d) ZA-A、(e) ZA-B 和(f) ZA-C 可逆轉維拉帕米刺激的ATP酶活性。根據發光變化（ΔRLU）來分析數據。 * 表示p＜；與基礎活動組或200μM維拉帕米治療組的ΔRLU相比為0.05。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。

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< p> 細胞週期和凋亡…

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ZA-A 和紫杉醇聯合治療的細胞週期和凋亡分析。 (…

圖4 ZA-A與紫杉醇聯合治療的細胞週期和凋亡分析。(a), (b), (c ) 和(d) 分別給出了Flp-InTM-293、ABCB1/Flp-InTM-293、HeLaS3 和KB/VIN 處理72 小時的細胞週期分佈資料。個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份(e) KB/VIN細胞系處理72小時的凋亡現象通過膜聯蛋白V測定。 （Y軸PI）分別代表壞死、晚期凋亡以及正常和早期凋亡。 p> 圖4

細胞週期與凋亡…

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ZA-A與紫杉醇合併治療的細胞週期與凋亡分析。 (…

圖4 ZA-A與紫杉醇聯合治療的細胞週期和凋亡分析。(a), (b), (c ) 和(d) 分別給出了Flp-InTM-293、ABCB1/Flp-InTM-293、HeLaS3 和KB/VIN 處理72 小時的細胞週期分佈資料。個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份(e) KB/VIN細胞系處理72小時的凋亡現象通過膜聯蛋白V測定。 （Y軸PI）分別代表壞死、晚期凋亡以及正常和早期凋亡。 p> 圖5

P-gp 抑制總結...

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P-gp 抑制機轉與多重抗藥性(MDR) 逆轉作用總結...

圖5 P-gp 抑制機制和多重抗藥性總結Zhankuic 酸的抗藥性（MDR）逆轉作用。 ZA-A、ZA-B 和 ZA-C 分別透過競爭性、非競爭性和競爭性抑制影響 P-gp 外排功能。這些作用導致細胞內化療藥物濃度增加，導致細胞凋亡。 所有人物 (8)