牛樟芝子實體乙醇萃取物透過 ERK、JNK、p38 和 PI3K/Akt 訊號路徑抑制基質金屬蛋白酶-2/9，從而抑制 CL1-5 人類肺腺癌細胞遷移
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< p> (a) CL1-5 細胞的活力…圖1
(a) 與EEAC 一起孵育的CL1-5 細胞的活力(0.125, 0.25, 0.5, 1.0 , 2.0 ,…
圖 1 (a) CL1-5 細胞與 EEAC (0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16、32、64 和 128μg/mL) 孵育 24 小時的活力使用MTT測定法測量細胞活力並以相對於對照的細胞存活百分比表示。 /mL 和1.0μg/mL EEAC 36 小時。 x軸上的數值代表DNA含量，而陰影面積代表S期細胞的百分比。用 EEAC 處理的 CL1-5 細胞中亞 G1 含量的百分比。數值為三個獨立實驗的平均值，標準差以豎條表示。 *P＜ 0.05； **P＜ 0.01。小寫字母表示 24 h，大寫字母表示 36 h。
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效果EEAC對傷口…
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EEAC 對CL1-5 細胞傷口癒合遷移的影響。傷口介紹...
圖2 EEAC對傷口癒合CL1-5細胞遷移的影響。透過用移液管尖端刮擦匯合的細胞層來引入傷口。將CL1-5細胞與EEAC(0.125、0.25、0.5和1.0μg/mL)一起培養36小時，計算細胞的遷移距離。 (a) 接受對照或 EEAC 處理的入侵細胞的代表性照片。 (b) 在每次處理的六個隨機視野中對穿過黑線的遷移細胞進行計數。裸露區的細胞平均數量透過三個獨立實驗進行量化。數值（平均值±SD，n = 3）差異顯著（P < 0.05）。
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效果EEAC對(a)…
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EEAC 對(a) CL1-5 細胞Transwell 遷移測定的影響。 CL1-5 細胞…
圖 3 EEAC 對 (a) CL1-5 細胞 Transwell 遷移測定的影響。將CL1-5細胞與EEAC（0.25、0.5和1.0μg/mL）一起孵育24小時和36小時，併計算（b）跨孔遷移細胞。在顯微鏡下拍攝CL1-5細胞遷移的照片（放大200倍）。數值（平均值±SD，n = 3）差異顯著（P < 0.05）。
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的效果EEAC 對MMP-2…
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EEAC 對CL1-5 細胞MMP-2 和MMP-9 活性的影響。 (a) 細胞…
圖4 EEAC對CL1-5細胞MMP-2和MMP-9活性的影響。 (a)以不同濃度（0.125、0.25、0.5和1.0μg/mL）的EEAC處理細胞36小時。收集條件培養基，並以明膠酶譜法測定MMP-2和MMP-9活性。 (b) 隨後透過光密度分析對這些蛋白質的活性進行量化。數值（平均值±SD，n=3）顯著不同（P＜0.05）（小寫字母表示MMP-2，大寫字母表示MMP-9）。
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的效果EEAC 對TIMP-1，...
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EEAC 對TIMP-1、TIMP-2、MMP-9 和MMP-2 蛋白表現的影響。 CL1-5細胞…
圖5 EEAC對TIMP-1、TIMP-2、MMP-9和MMP-2蛋白表現的影響。以 0.125、0.25、0.5 和 1.0μg/mL 處理 CL1-5 細胞 36 小時，對細胞裂解物進行 SDS-PAGE，然後進行蛋白質印跡，隨後透過光密度分析進行定量（使用對照作為 100%）。這些值表示每種蛋白質與對照組相比的密度比例。
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濃度- EEAC 對…的依賴性影響
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EEAC 對PI3K、磷酸化AKT 蛋白表現量的濃度依賴性影響…
圖6 EEAC 的濃度依賴性影響EEAC 對 PI3K、磷酸化 AKT 和 Rac-1 蛋白質表現量的影響。在濃度依賴性測定中，CL1-5細胞以0.125、0.25、0.5和1.0μg/mL的EEAC處理36小時。 Western blotting分析PI3K的表達、AKT和Rac-1的磷酸化。 β-肌動蛋白作為加載對照。這些值表示每種蛋白質與對照組相比的密度比例。
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效果EEAC對蛋白質量的影響...
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EEAC 對MAPK 訊號和磷酸化黏著斑蛋白水準的影響...
圖7 EEAC 對MAPK 訊號和磷酸化斑蛋白水平的影響CL1-5 細胞中的磷酸化黏著斑激酶 (p-FAK)。 (a) 以幾種不同濃度的 EEAC（0.125、0.25、0.5 和 1.0μg/mL）處理 CL1-5 36 小時。 (b) PI3K抑制劑(LY294002; 50μM)、ERK1/2抑制劑(PD98059; 50μM)、JNK抑制劑(SP600125; 50μM)和p38 MAPK抑制劑(SB203580; 50μM)對EEACMMP -2和-9。在用1.0μg/mL EEAC處理36小時（總抑制劑暴露時間為37小時）之前，用抑制劑（50μM）預處理細胞1小時。以蛋白質印跡法測定MMP-2和-9的蛋白質表現。
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提議的訊號EEAC 介導的路徑...
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EEAC 介導的抑制 CL1-5 細胞遷移的建議訊號路徑。效果...
圖 8 EEAC 介導的 CL1-5 細胞遷移抑制的建議訊號路徑。 EEAC 的作用可能是透過抑制 FAK 來實現的，FAK 透過 MAPK 和 PI3K/AKT 訊號通路調節 Rac-1/MMP-9 的表達。 所有人物 (8)