牛樟芝乙醇萃取物對人類肺癌A549細胞和C57BL/6J同種異體移植腫瘤模型中細胞生長、遷移和抗藥性的抑製作用

摘要

本研究的目的是探討牛樟芝乙醇萃取物（EEAC）對肺癌的抑制活性。分別使用(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基溴化四唑) (MTT) 測定和流式細胞儀分析細胞增殖和細胞週期分佈。分別使用傷口癒合測定、蛋白質印跡和小鼠腫瘤模型來檢查細胞遷移、蛋白質表現和腫瘤抑制。我們的結果表明，EEAC 誘導細胞週期停滯在 G0/G1 期，導致 A549 細胞的細胞活力下降。此外，EEAC 上調生長抑制蛋白、腺苷 5'-單磷酸激活蛋白激酶 (AMPK)、p21 和 p27，但下調生長促進蛋白、蛋白激酶 B (Akt)、哺乳動物雷帕黴素靶標(mTOR)、細胞外訊號調節激酶1/2 (ERK1/2)、視網膜母細胞瘤蛋白(Rb)、細胞週期蛋白E 和細胞週期蛋白D1。 EEAC 也抑制 A549 細胞遷移並減少明膠酶的表達。此外，我們的數據表明，在小鼠同種異體移植腫瘤模型中，使用 EEAC 治療後，腫瘤生長受到抑制。 EEAC 中的一些生物活性化合物，如蟲草素和占奎酸 A，已被證明可以降低 A549 細胞中基質金屬蛋白酶 (MMP)-9 和細胞週期蛋白 D1 的蛋白質表現。此外，EEAC 透過降低 Caveolin-1 的蛋白質水平增強了 A549 對紫杉醇的化學敏感性。我們的數據表明，EEAC有潛力成為肺癌治療的輔助藥物。 g001.jpg" alt="圖1" />

圖1

乙醇萃取物的生長調節…

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牛樟芝乙醇萃取物(EEAC) 在A549 細胞中的生長調節。細胞…

圖 1 牛樟芝乙醇萃取物 (EEAC) 在 A549 細胞中的生長調節。分別使用(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物) (MTT) 測定 (a) 和流式細胞儀(b) 檢測用不同濃度的EEAC 處理24 小時的A549 細胞。 0.05且**p＜0.05與對照組（未進行 EEAC 治療）相比，分別為 0.01。

圖2

< p> EEAC 對細胞的影響...

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EEAC 對A549 細胞中細胞生長相關蛋白的影響。細胞經過處理...

圖 2 EEAC 對 A549 細胞中細胞生長相關蛋白的影響。用多種濃度的 EEAC 處理細胞 30 分鐘，以檢查 AMPKα、Akt、mTOR 和 ERK1/2 (a) 的表達和/或活化程度。每個數值代表表1中三個獨立實驗的平均值。 ，且倍數變化單一蛋白質的數量顯示為直方圖。 * p < 0.05且**p＜0.05與對照組（僅以載體治療）相比，分別為0.01。

圖3

< p> 透過…抑制細胞遷移

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EEAC 在A549 細胞抑制細胞遷移。細胞刺激...

圖 3 EEAC 在 A549 細胞抑制細胞遷移。以 10% FBS 刺激細胞以誘導細胞遷移，並與不同濃度的 EEAC 共培養。圖片是在 EEAC 處理 0、12 和 24 小時後取得的 (a)。透過計算每組與初始時間（b）相比的無細胞間隙，將遷移抑製表示為傷口閉合的百分比。 ** p <與初始時各組相比為0.01。

圖4

< p> EEAC 對…的抑制

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EEAC 對A549 細胞明膠酶的抑製作用。 ...

圖4 EEAC對A549細胞明膠酶的抑製作用。在與不同濃度的 EEAC 孵育 24 小時的 A549 細胞中檢查明膠酶、MMP-2 和 MMP-9 的表達量。每組的條帶強度進行定量並標準化為對照組，明膠酶的相對表現量以直方圖中的倍數變化表示。 * p <與對照組（僅以媒介物處理）相比，為 0.05。

圖5

< p> 戰葵酸A…的影響

圖5 戰葵酸A與蟲草素對cyclin蛋白表現的影響…

圖5 戰葵酸A與蟲草素對cyclin蛋白表現的影響…

圖5 戰葵酸A與蟲草素對cyclin蛋白表現的影響…

蟲草素對A549細胞cyclin D1及MMP-9蛋白表現的影響檢測詹奎酸A或蟲草素孵育A549細胞24 h後cyclin D1和MMP-9的表達量。每組的條帶強度進行定量並標準化為對照組，明膠酶的相對表現量以直方圖中的倍數變化表示。 * p < 0.05且**p＜0.05與對照組（僅以載體治療）相比，分別為0.01。 Con，控制； ZA，詹奎酸A； Cor，蟲草素。

圖6

< p> EEAC 增強A549 細胞的化療敏感性...

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EEAC 增強A549 細胞對紫杉醇的化療敏感性。細胞與EEAC一起孵育...

圖6 EEAC增強A549細胞對紫杉醇的化療敏感性。將細胞與 EEAC (6.25 μg/mL)、紫杉醇 (0.156 μM; Pac) 或 EEAC 合併紫杉醇孵育 24 h，以檢測細胞活力的變化 (a)。在相同實驗條件下，以Western blot(b)檢測cav-1蛋白的表達量。各組的條帶強度進行定量並標準化為對照組，且cav-1蛋白的相對表現量以直方圖中的倍數變化呈現。 * 表示 p <與單獨紫杉醇組相比為0.05。 Pac，紫杉醇； Cav-1、caveolin-1。

圖7

< p> EEAC 對細胞週期蛋白的影響...

圖7

EEAC 對LLC 細胞中細胞週期蛋白D1 和MMP-9 表現的影響。細胞…

圖 7 EEAC 對 LLC 細胞中細胞週期蛋白 D1 和 MMP-9 表現的影響。將細胞與 25 μg/mL EEAC 一起孵育 24 小時，以分析細胞週期蛋白 D1 和 MMP-9 蛋白的翻譯量。將每組的條帶強度定量並標準化為對照組（僅用載體處理），檢測到的蛋白質的相對表現以直方圖中的倍數變化呈現。 **表示分別與對照組比較p＜0.01。

圖8

< p> EEAC 抑制腫瘤生長...

圖8

EEAC 抑制Lewis 肺癌同種異體移植模型中的腫瘤生長。腫瘤…

圖8 EEAC抑制Lewis肺癌同種異體移植模型中的腫瘤生長。在研究結束時對虛線表示的腫瘤組織進行拍照。 (a)各組的腫瘤體積(b)和體重(c)以直方圖顯示。 NC：正常對照，PC：LLC組。 ** p <與 PC 組（僅使用載體治療）相比為 0.01。 所有人物 (8)