牛樟芝多醣激活自噬並調節NLRP3降解改善肝損傷相關發炎反應
摘要
本研究從自噬活化的角度闡述了ACP的肝臟保護機制。 ACP抑制KCs的發炎損傷，降低細胞凋亡率。 LTG和LC3染色後，ACP促進溶小體產生，增加LC3表達，活化自噬，抑制NLRP3和發炎因子的表達。在電子顯微鏡下，ACP加速了自噬體的產生。 3-MA和ACP同時處理後，ACP抗KC損傷的作用降低，NLRP3表達上調，自噬作用受到抑制。在小鼠肝損傷模型中發現，ACP可抑制ALT和AST水平，促進自噬作用的發生，降低NLRP3的表達，減輕肝損傷。 ACP透過活化自噬誘導NLRP3降解，進而抑制肝損傷時的發炎反應，發揮保肝作用，這是ACP的作用機制之一。 ="/zb_users/upload/2024/12/aging-14-204330-g001.jpg" alt="圖1" />
圖1
ACP 抑制細胞損傷和…圖1
ACP 抑制細胞損傷並活化自噬作用(n=3)。 ( A , B )… 圖1 ACP 抑制細胞損傷並活化自噬作用(n=3)。 > A, B) 流式細胞儀顯示LPS誘導細胞損傷並顯著增加細胞凋亡率，而ACP以劑量依賴性方式抑制細胞凋亡。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。 (C) 細胞活力檢測顯示LPS組細胞活力下降，低於DMSO組，而ACP則抑制LPS。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。 (D)電鏡觀察DSMO組未見明顯溶小體或自噬體形成，而LPS組可見較弱的自噬激活，ACP組檢測到明顯的自噬體，提示ACP激活了自噬作用。 (E)LC3螢光染色顯示，LC3在DMSO中不顯著激活，在LPS中低表達，在ACP中顯著上調，高於DMSO和LPS組。 (F) 溶小體探針LTG分析顯示ACP促進了溶小體形成並顯著增強了螢光強度。
圖2
< b> ACP 抑制發炎反應並…圖2
ACP 抑制發炎反應和NLRP3 活化。 ( A ) NLRP3螢光染色…圖2 ACP抑制發炎反應和NLRP3活化。 LPS促進NLRP3表達，螢光強度顯著增強，而ACP抑制NLRP3表達，顯著低於LPS組。 (B–D)發炎因子檢測顯示，ACP可降低IL-1β、IL-18和TNF-α的表達，且與LPS相比差異顯著群體。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。 (E,F)蛋白檢測顯示ACP組LC3表現量顯著升高，P62、NLRP3表現量降低，且NLRP3表現量與LC3表現量呈負相關。同時，LC3 II表達增加，顯示自噬被活化。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。 (G)當LC3 I轉化為LC3 II時，LC3 I與LC3 II的比例顯著增加，顯示自噬被激活，自噬流程順暢。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。
圖3
< b> 抑制自噬作用會拮抗此作用...圖3
抑制自噬作用會拮抗ACP 的作用（n=3）。 ( A , B )… 圖3 抑制自噬拮抗ACP的作用(n=3)。 A, B) 流式細胞儀結果顯示3-MA抑制自噬，ACP的作用被拮抗。且3-MA+ACP組細胞凋亡率明顯升高，高於ACP組。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。 (C) LC3染色顯示3-MA抑制了LC3的表達，螢光強度減弱。 (D) LTG 探針檢測顯示 3-MA 抑制溶小體形成。
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< b>抑制自噬增強發炎反應…圖4
抑制自噬增強發炎反應和NLRP3表現。 ( A ) NLRP3染色…圖4 抑制自噬增強發炎反應和NLRP3表達。 (A) NLRP3染色結果顯示,3-MA拮抗ACP的作用,3-MA+ACP組NLRP3表現顯著上升,高於ACP組。 (B–D) 3-MA+ACP組發炎因子IL-1β、IL-18、TNF-α表現量高於ACP組。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。 (E–G)蛋白檢測顯示3-MA抑制自噬，3-MA+ACP組LC3表現減少，NLRP3和P62表達增加，差異與ACP組相比有顯著性意義。同時，LC3 II/LC3 I 比值下降。 *與DMSO相比P＜0.05，與LPS相比#P＜0.05。
圖5
< b> ACP 抑制了小鼠的肝損傷...圖5
ACP 抑制了小鼠的肝損傷(n=5)。 ( A ) 在 H&E 染色中，…圖 5 ACP 抑制小鼠肝損傷 (n=5)。 ) H&E染色顯示，D/L組肝組織出現明顯的發炎反應和損傷，並伴隨明顯的氣泡狀病變，而ACP則抑制組織炎症，減輕損傷。 (B)NLRP3染色顯示，D/L組NLRP3表達顯著升高，而Control組則無表達，顯示肝損傷導致NLRP3活化。 ACP顯著降低組織中NLRP3的表達，且與D/L組相比差異顯著。 (C, D) 在ALT和AST檢測中，ACP減輕肝損傷，並以劑量依賴性方式降低ALT和AST表現。 *與對照組比較P＜0.05，與D/L比較#P＜0.05。
圖6
< b> ACP 抑制發炎反應並…圖6
ACP 抑制發炎反應並活化自噬作用。 ( A – F ) As…圖6 ACP抑制發炎反應並活化自噬作用。 b >–F)血清和組織發炎因子檢測發現，D/L組血清和組織發炎因子表現量升高，且顯著高於Control組。而ACP則以劑量依賴的方式降低血清發炎因子水平。與對照組相比*P＜0.05，與D/L相比#P＜0.05。 (G–I) 蛋白檢測中，ACP促進組織中LC3表達，同時抑制NLRP3表達，同時P62表達增加，LC3 II/LC3 I比值增加在組織中。 *與對照組比較P＜0.05，與D/L比較#P＜0.05。