4-乙醯蒽醌醇 B 在皮下異種移植和體內血管生成模型中透過 VEGF/PI3K/ERK/mTOR 依賴性訊號路徑抑制前列腺癌生長和血管生成

摘要

攝護腺癌是已開發國家男性癌症相關死亡的主要原因。該化合物 4-乙醯基蒽醌醇 B (4AAQB) 是從牛樟芝（俗稱 Niu-Chang-Chih）中分離出來的，已被證明可以抑制癌症生長。然而，4AAQB 的抗癌活性先前尚未在前列腺癌中進行研究。本研究旨在探討4AAQB對癌症和血管生成的影響，並探討其作用機轉。使用人類前列腺癌細胞（PC3）和人類臍靜脈內皮細胞（HUVEC）進行細胞活力、細胞遷移和細胞週期功能測定，以評估 4AAQB 的體外抗癌和抗血管生成功效。使用異種移植和血管生成模型確定 4AAQB 的體內作用。也檢查了 4AAQB 下游的訊號事件。 4AAQB 化合物抑制 PC3 細胞生長和遷移，並減少體內癌症生長，如皮下異種移植模型所示。此外，4AAQB 抑制 HUVEC 遷移、管形成和主動脈環萌芽；在體內基質膠植入血管生成測定中，它也減少了新血管形成。 4AAQB 化合物也減少了體內 PC3 前列腺癌模型的轉移。血清或血管內皮生長因子(VEGF) 誘導的VEGF 受體2 (VEGFR2)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/Ak 菌株轉化(Akt) 和細胞外訊號調節激酶1/2 (ERK 1/2)磷酸化在4AAQB 中被減弱PC3 和 HUVEC。總之，4AAQB 是前列腺癌治療的潛在候選者。 " alt="圖1" />

圖1

4AAQB 對…的影響

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影響4AAQB 對前列腺癌細胞活力、細胞毒性和細胞週期的影響：…

圖1 4AAQB 對前列腺癌細胞活力、細胞毒性和細胞週期的影響：(A) PC3 細胞活力透過MTT測定檢測DU145細胞活力，以SRB測定檢測DU145細胞活力； (B)以BrdU測定檢測4AAQB對PC3細胞的抗增殖作用。數據表示為平均值±SEM (n = 5)； (C) 根據製造商的方案檢測 LDH 釋放。數據表示為平均值±SEM (n = 6)； (D) PC3 細胞以載體 (V) 或 4AAQB 處理並以流式細胞儀進行分析。細胞週期分佈以細胞週期階段的百分比顯示。數據表示為平均值±SEM (n = 6)。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，且***p＜0.01與對照組 (C) 或媒介物 (V) 組相比為 0.001。 S表示飢餓組。 NS：無意義。

圖2

< p> 化合物4AAQB 抑制PC3…

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化合物4AAQB 抑制PC3 細胞遷移、VEGF 產生及訊號路徑蛋白…

圖 2此化合物4AAQB 可抑制PC3 細胞遷移、VEGF 產生和訊號路徑蛋白磷酸化。 (A) 透過相差光學顯微鏡定量底側濾膜中遷移的 PC3 細胞（每個濾膜三個視野）。數據表示為平均值±SEM (n = 6)。計算細胞數並顯示在(B)中； (C)以載體或不同劑量的4AAQB處理24小時的PC3單層細胞的傷口癒合遷移。數據表示為平均值±SEM (n = 6)。計算細胞數並顯示在(D)中； (E) 以 ELISA 評估 VEGF 蛋白表達，數據表示為平均值±SEM (n = 6)； (F)透過Western blotting檢測PC3細胞的蛋白質磷酸化。蛋白質的相對磷酸化表示為 ImageJ 測定的磷酸化蛋白質與總蛋白質之間比率的平均密度。數據表示為平均值±SEM (n = 3)。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，且***p＜0.01與對照組 (C) 或媒介物 (V) 組相比為 0.001。 S表示飢餓組。 NS：無意義。

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< p> 4AAQB 在…中的抗癌作用

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4AAQB 在體內模型中的抗癌作用：施用給SCID 小鼠…

圖3 4AAQB 在…中的抗癌作用體內模型：給予媒介物或指定劑量的4AAQB 的SCID 小鼠顯示在(A–C)（媒介物(V)、0.5 mg/kg 和 2分別為毫克/公斤）；異種移植模型的腫瘤體積顯示在(D)；數據表示為平均值±SEM (n = 8)； (E)透過染色顯示癌症異種移植物中CD34的表達，並對CD34免疫反應(IR)細胞進行計數。數據表示為平均值±SEM (n = 6)。比例尺 = 1 cm (A–C) 或 10 μm (E)。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，且***p＜0.01與車輛相比為 0.001 (V)。

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< p> 4AAQB 對…的影響

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4AAQB 對HUVEC 增殖及體外和離體的影響…

圖4 4AAQB 對HUVEC 的影響增殖以及體外和離體遷移：(A) LDH 釋放根據製造商的方案進行檢測。數據表示為平均值±SEM (n = 6)； (B) 以 BrdU 測定檢測 HUVEC 細胞活力。數據表示為平均值±SEM (n = 4)； (C) 透過相差光學顯微鏡對底側濾膜中遷移的 HUVEC 進行定量（每個濾膜三個視野）。數據表示為平均值±SEM (n = 6)。計算細胞數； (D) 將大鼠主動脈環拍照併計算出芽面積並表示為平均值±SEM (n = 6)。 * p < 0.05且***p＜0.05與對照組 (C) 組相比為 0.001。 S表示飢餓組。

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< p> 4AAQB 對…的影響

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4AAQB 對HUVEC 基質膠管形成的影響。用 VEGF 處理的 HUVEC，…

圖 5 4AAQB 對 HUVEC 基質膠管形成的影響。以VEGF、媒介物(V)或不同濃度的4AAQB處理的HUVEC拍照(A)，並定量分析管長度作為相對於對照組的倍數變化( B）。數據表示為平均值±SEM (n = 6)。 ** p < 0.01且***p＜0.01與對照組（C）組相比為0.001。

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< p> 4AAQB 對…的影響

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4AAQB 對體內血管生成模型的影響。 ( A )…

圖6 4AAQB對體內血管生成模型的影響。 (A) 對 DIVAA 管拍照並測量血紅素水平。數據表示為平均值±SEM (n = 6)； (B) 計算 CAM 的血管密度並表示為平均值±SEM (n = 5)； (C) PC3細胞肺表面轉移區域顯示為白色，背景為深紅色。使用 ImageJ 軟體對白色區域進行量化。數據表示為平均值±SEM (n = 8)。 * p < 0.05且***p＜0.05與對照組 (C) 或媒介物 (V) 組相比為 0.001。

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4AAQB 對VEGF-R2/PI3 p85α/mTOR/ERK 路徑的影響：( A ) 抑制…

圖7 4AAQB對VEGF-R2/PI3 p85α/mTOR/ERK路徑的抑製作用：(A) 不同濃度4AAQB對VEGFR2、PI3K的抑製作用Western blotting檢測HUVEC中的mTOR、ERK路徑； (B) 蛋白質的相對磷酸化表示為透過 ImageJ 確定的磷酸化蛋白質與總蛋白質之間比率的平均密度，數據表示為平均值±SEM (n = 5)。 ** p < 0.01且***p＜0.01與載體 (V) 組相比為 0.001。

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< p> 4AAQB 抑制癌症生長並…

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4AAQB 透過VEGF/PI3K/mTOR/ERK 依賴性訊號路徑抑制癌症生長和血管生成。

圖8 4AAQB 透過 VEGF/PI3K/mTOR/ERK 依賴性訊號路徑抑制癌症生長和血管生成。 所有人物 (8)