牛樟芝透過上調腫瘤抑制因子 miR-142-3p 增強 5-FU 的化療敏感性並抑制結腸腫瘤發生和癌症乾性

摘要

5-氟尿嘧啶 (5-FU) 方案仍然是治療結腸癌的第一線藥物的支柱，但這些患者常常會產生抗藥性。癌症幹細胞（CSC）被認為是抗藥性和腫瘤復發發展的關鍵因素之一。我們的目的是為 Antrodiacinnamomea (AC) 提供臨床前證據，作為抑制結腸癌 CSC 克服 5-FU 抗藥性的潛力。採用包括細胞活力、集落形成、AC+5-FU藥物組合指數和腫瘤球生成在內的體外測定來確定AC的抑制效果。也納入小鼠異種移植模型來評估AC的體內效果。 AC處理顯著抑制增殖、集落形成和腫瘤球生成。 AC 也抑制致癌標記（NF-κB 和C-myc）、EMT/轉移標記（波形蛋白和MMP3）和乾性相關標記（β-連環蛋白、SOX-2 和Nanog）的表達。 AC 和 5-FU 的順序治療在體內和體外協同作用並降低結腸癌的活力。從機制上講，AC 介導的抗腫瘤作用與腫瘤抑制 microRNA（尤其是 miR142-3p）水平的增加有關。 AC可以作為一種有效的協同佐劑，透過刺激結腸癌中的凋亡相關基因、抑制發炎和轉移基因，下調癌症乾性基因並增強5-FU的抗腫瘤能力。

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AC 處理會降低存活率...

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AC 處理會透過誘導細胞凋亡來降低CRC 細胞的存活率。 ( A… 圖 1 AC 處理 透過誘導細胞凋亡降低 CRC 細胞的活力。(A) 細胞活力測定顯示 AC 有效抑制 CRC 細胞的細胞活力。II 在所有三種細胞（SW480、SW620 和HCT116）中的IC50 值均已顯示（B），AC 有效抑制集落形成能力（C。) 使用AC (100 µg/mL) 處理結腸癌細胞系24 小時，然後透過流式細胞儀分析膜聯蛋白-V+ 和PI+ 染色細胞的凋亡情況，AC 顯著誘導CRC 細胞（SW480、SW620）凋亡。數字表示膜聯蛋白-V+ 細胞的百分比（分別為對照與AC 處理，左和右）(D) 來自AC 處理的結腸的全細胞裂解物的蛋白質印跡。 PARP（促凋亡標記物）水準顯著增加

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透過…抑制癌症乾性

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透過AC 治療抑制癌症乾性。 ( A ) 腫瘤球形成…

圖 2 透過 AC 治療抑制癌症幹細胞。 (A) 腫瘤球形成測定。以 AC（100 µg/mL，48 小時）處理的結腸癌細胞在去血清培養條件下產生的腫瘤球數量顯著減少。 *** p < 0.001。 (B) q-PCR 分析顯示，AC 治療下調癌症幹細胞標記 β-catenin、SOX-2、Nanog。 ** p < 0.01，*p＜0.01 0.05。 (C) Aldeflor 測定表明，AC 處理（100 µg/mL，48 小時）可顯著且劑量依賴性地降低所有三種檢查的結腸癌細胞系中的 ALDH1 酶活性。

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AC治療增加了5-FU 敏感性...

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AC 治療增加了結腸癌細胞的5-FU 敏感性。藥物組合測定，不同... 圖 3 AC 治療增加了結腸癌細胞中 5-FU 的敏感性。藥物聯合測定，不同濃度的AC和5-FU合併使用，計算聯合指數（CI）。標準化等效線圖證明 AC 和 5-FU 的組合可協同抑制結腸癌細胞的細胞活力。 CI值< 1表示協同作用。

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AC 對CRC 細胞株訊號路徑的影響。 AC (100…

圖4 AC對CRC細胞株訊號路徑的影響。對CRC細胞給予AC (100 μg/mL)處理24 h。(A) AC顯著降低EMT相關的β-連環蛋白和波形蛋白基因表達，(B) 抑制致癌標記NF-κb、C-myc 和MMP3，以及(C) 上調miRNA 表達，特別是miR142-3p 和miR142-3p 表達負調節ABCG2。 p>

...的體內腫瘤抑製作用

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AC的體內腫瘤抑製作用。 ( A ) 人體照片...

圖5 AC的體內腫瘤抑製作用。 (A) 將人類結腸癌細胞DLD-1（1×106個細胞/注射，皮下）的照片注射到NDO/SCD小鼠體內，建立腫瘤異種移植模型。當腫瘤大小變得明顯時，將小鼠分為四組：載體對照、AC (50 mg/Kg)、5-FU (10 mg/kg) 和組合AC + 5-FU (30 mg/kg 5- FU + 10 毫克/公斤交流）。 (B) 腫瘤抑制效果評價，AC + 5-FU 的協同作用顯著減小了聯合治療組的腫瘤大小，隨後 AC 和 5-FU 單獨治療。 (C) 動物的平均體重，除5-FU組外，治療對動物體重沒有負面影響。 * p < 0.05，**p＜0.05 0.01，且***p＜0.01 0.001。