常見ABCB1基因變異對牛樟芝萃取物抑制P-糖蛋白的功能影響

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圖1.效果EEAC對P-gp…

圖1. EEAC 對P-gp mRNA 和蛋白質表現量的影響。

( a )(…

圖1. EEAC 對P-gp mRNA 和蛋白質表現量的影響。(a)(b) 使用C219 單株抗體對P-gp 表現進行蛋白質印跡 ( 2 µg 蛋白質/泳道）。對照組。 /ml EEAC 處理P-gp 表現的細胞24、48 和72 小時後(f) 以MTT 測定進行EEAC 對Flp-In™ 293、ABCB1 1236C-2677G-3435C 的細胞毒性研究。 -2677T-3435T和ABCB1 1236T-2677A-3435T分別為21.27、29.31、20.60和22.74 µg/ml，IC50無顯著差異。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。

圖2. EEAC影響力評估… < /p>

圖2. EEAC對P-糖蛋白流出功能影響的評估。

( a ) 羅丹明…

圖 2. EEAC 對 P-糖蛋白流出功能影響的評估。 (a)羅丹明123流出測定：EEAC以濃度依賴性方式抑制P-gp介導的羅丹明123流出。維拉帕米 10 µM 用作陽性對照。 EEAC 顯著抑制野生型 P-gp 以及兩種變異型 P-gp 中的羅丹明 123 外流。與沒有EEAC的羅丹明123流出(對照)相比，*p＜0.05。 (b)鈣黃綠素-AM攝取測定：EEAC以劑量依賴性方式增加野生型P-gp以及兩種變體型P-gp中鈣黃綠素的細胞內累積。維拉帕米 10 µM 用作陽性對照。與沒有EEAC的鈣黃綠素-AM攝取(對照)相比，*p＜0.05。 (c) 阿黴素 (10 µM) 流出測定：EEAC 以濃度依賴性方式抑制 P-gp 介導的阿黴素流出。 EEAC 顯著抑制野生型 P-gp 以及兩種變異型 P-gp 中的阿黴素外流。與沒有EEAC(對照)的阿黴素流出相比，*p＜0.05。 (d) EEAC對 ABCB1 1236C-2677G-3435C (野生型)、ABCB1 1236T-2677T-3435T 和 ABCB1 1236T-2677A-3435T 的羅丹明 123 外流抑製作用的研究顯示EEAC 對野生型P-gp 的羅丹明123 外流的抑製作用最有效。以上數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。與沒有EEAC的羅丹明123流出(對照)相比，*p＜0.05。

圖 3. EEAC 對 P- 的影響糖蛋白…

圖3. EEAC 對P-糖蛋白ATP 酶活性的影響。

(a) 與 EEAC 一起孵育...

圖 3. EEAC 對 P-糖蛋白 ATP 酶活性的影響。 (a) 與 EEAC (0.01–200 µg/ml) 一起孵育可刺激 P-gp ATP 酶活性。數據按照 RLU 進行分析。 (b) 維拉帕米 (25–400 µM) 顯示出其刺激 P-gp ATP 酶活性的能力。 (c) 測試 EEAC (1–100 µg/ml) 抑制 200 µM 維拉帕米刺激的 P-gp ATP 酶活性的能力。上述結果表明，EEAC 在濃度 5 µg/ml 時刺激 P-gp ATPase 活性並抑制 200 µM 維拉帕米刺激的 P-gp ATPase 活性。

圖4. 濃度依賴性羅丹明123流出(10–30…

圖4. 在有或沒有EEAC 的情況下，濃度依賴性羅丹明123 流出(10–30 µM)。

圖4. 濃度依賴性羅丹明123 流出(10 –30 µM）在有或沒有EEAC 的情況下，左圖顯示了羅丹明123 外流的非線性迴歸分析，右圖顯示了羅丹明123 外流的Lineweaver-Burk 圖分析(a ) 野生型P-gp ( 1236C-2677G-3435C)。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。與沒有EEAC的羅丹明123流出(對照)相比，*p＜0.05。

圖5. 濃度依賴性阿黴素流出 ( 10–30 µM)…

圖 5. 在有或沒有 EEAC 的情況下，濃度依賴性阿黴素流出 (10–30 µM)。

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圖 5. 在有或沒有 EEAC 的情況下，濃度依賴性阿黴素流出 (10–30 µM)。 左圖顯示了阿黴素流出的非線性迴歸分析，右圖顯示了阿黴素流出的Lineweaver-Burk 圖分析。 (a) 野生型 P-gp (1236C-2677G-3435C)。 (b)變異型P-gp(1236T-2677T-3435T)。 (c) 變異型 P-gp (1236T-2677A-3435T)。數據表示為至少三個實驗的平均值±SE，每個實驗一式三份。與沒有EEAC(對照)的阿黴素流出相比，*p＜0.05。